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第一部分:祛积通络方治疗视网膜分支静脉阻塞黄斑水肿的临床研究[目的]评价祛积通络方联合抗VEGF药物治疗视网膜分支静脉阻塞(Branch retinal artery occlusion,BRVO)黄斑水肿的临床疗效,通过眼底相干光层析血管成像术(Optical Coherence Tomography Angiography,OCTA)检测黄斑形态变化视功能的相关性。[方法]纳入100例初诊为BRVO、中央视网膜厚度(Central retinal thickness,CRT)≥300um、病程小于4周的初次发病患者,随机分为对照组和试验组各50例,对照组采用抗VEGF(1+PRN),试验组祛积通络方联合抗VEGF(1+PRN),治疗6个月,分别于治疗前、治疗后1、3、6个月记录ETDRS视力字母数;光学相干断层扫描(Optical Coherence Tomography,OCT)记录 CRT,OCTA 记录浅层毛细血管层(Superficial Capillary Plexus,SCP)、深层毛细血管丛(Deep Capillary Plexus,DCP)血管灌注面积及 SCP-FAZ(Foveal Avascular Zone,中心凹无血管区)、DCP-FAZ面积;治疗6月时记录两组注药次数;治疗前后按中医证候评分标准进行评分。[结果]研究结束时,有6例脱落,其中试验组脱落2例,对照组脱落4例。1中医证候分析94例患者治疗前后按中医证候评分标准进行评分,其中对照组46例总有效率为52%。试验组48例总有效率为85%,经χ2检验,χ2=5.76,差异有统计学意义(P<0.05)。2 ETDRS视力采用早期糖尿病视网膜病变治疗研究(Early Treatment Diabetic Retinopathy Study,ETDRS)视力表检查,随访6个月,对照组46眼中有22眼(47.82%)ETDRS视力治疗显效,15眼(32.60%)有效,总有效率为80.42%;5例出现黄斑水肿加重,其中1眼出现新生血管性青光眼。试验组48眼中有40眼(83.33%)ETDRS视力治疗显效,2例(4.17%)无效,出现黄斑水肿加重,总有效率为90.83%。两组6个月ETDRS视力进行比较,对照组与试验组在治疗后6个月ETDRS视力差异有统计学意义(χ2=5.21,P<0.05)。3黄斑区视网膜中央厚度两组治疗后CRT明显降低,各组治疗后1月、3月、6月相对于治疗前的变化,均有统计学意义。两组间治疗后6月比较,无统计学意义。两组间治疗后1月、3月、6月相对于治疗前的变化值比较,均有统计学意义。4浅层毛细血管灌注面积 两组治疗后SCP血管灌注面积均有增加,各组治疗后1月、3月、6月相对于治疗前的变化,均有统计学意义。两组间治疗后1月、3月、6月相对于治疗前的变化值比较,均有统计学意义。5深层毛细血管灌注面积 两组治疗后DCP灌注面积均有增加,除对照组治疗后1月与治疗前比较无统计学意义外,各组治疗后1月、3月、6月相对于治疗前的变化,均有统计学意义。两组间治疗后1月、3月、6月相对于治疗前的变化值比较,均有统计学意义。6 SCP-FAZ和DCP-FAZ两组治疗后SCP-FAZ和DCP-FAZ均有明显减少,两治疗后1月、3月SCP-FAZ和DCP-FAZ平均值相比,均无统计学意义;治疗后6月,SCP-FAZ和DCP-FAZ平均值相比,均有统计学意义;两组治疗后3月、6月相对于治疗前的变化值比较,均有统计学意义。7注药次数治疗6个月对照组平均注药次数是4.35±0.24;试验组平均注药次数是3.23±0.08。两组比较P<0.05,有统计学差异。8相关性分析视网膜中央厚度CRT与相应时间的ETDRS视力呈负相关(r=-0.501,P<0.05)。而视网膜黄斑区浅层毛细血管SCP和深层毛细血管DCP中更好的血管灌注与ETDRS视力字母数显著正相关(r=0.695,P<0.01;r=0.863,P<0.001)。而 SCP-FAZ 和 DCP-FAZ 与 ETDRS 视力字母数呈负相关(r=-0.583,P<0.05;r=-0.621,P<0.05)。[结论]在视网膜分支静脉阻塞合并黄斑水肿的发生过程中,黄斑水肿反复发作与黄斑微血管损伤密切相关,保持良好的视网膜灌注,对于BRVO视功能的恢复至关重要。祛积通络方联合抗VEGF治疗与单纯抗VEGF治疗组比较,在增加ETDRS视力、SCP/DCP的血管灌注和降低CRT、SCP-FAZ和DCP-FAZ的面积大小上,均有明显的统计学差异。且联合中药治疗明显改善患者中医证候,并减少注药次数,减轻患者的经济负担。第二部分:祛积通络方调控视网膜静脉阻塞大鼠视网膜组织中HIF1 α/VEGF通路的作用机理研究[目的]探讨祛积通络方通过调控视网膜静脉阻塞(Retinal Vein Occlusion,RVO)大鼠模型视网膜组织中HIFI α/VEGF通路,从而干预视网膜静脉阻塞疾病发生过程的作用机理。[方法]建立RVO大鼠模型,试验组分高、中、低剂量祛积通络方予大鼠灌胃,阴性对照组为等体积生理盐水灌胃,两组阳性对照组分别为复方血栓通胶囊灌胃和抗VEGF玻璃体腔注射,通过逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)、免疫荧光法、Western-Blot检测方法,观察祛积通络法治疗前后RVO大鼠模型视网膜组织中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF1α)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、血管细胞粘附分子(Vascular Cell Adhesion Mole-1,VCAM-1)的表达。[结果]1免疫荧光半定量结果显示:模型组与正常组相比,大鼠视网膜组织中HIF1α、VEGF、VCAM-1蛋白表达明显增加,不同干预治疗28d后,三种蛋白均下降,各组与模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);其中高剂量祛积通络组抑制HIF1α、VEGF、VCAM-1蛋白表达作用最明显,与抗VEGF组相比,两组降低HIF1α、VCAM-1蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05),而降低VEGF蛋白的表达,高剂量祛积通络组与抗VEGF组、中剂量组比较无明显差异(P>0.05)。2RT-PCR结果显示:HIF-1α、VEGFmRNA在正常对照组有微量表达,模型组表达量明显升高,不同干预后,表达量均下降。HIF-1 α mRNA的表达量,除高剂量组祛积通络法与抗VEGF组相比,差异无统计学意义外(P>0.05),其余各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF mRNA的相对表达量,各组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3 Western-Blot结果显示:空白对照组视网膜组织中有少量HIF1 α、VEGF蛋白量的表达,模型组视网膜组织中HIF1 α、VEGF蛋白量的表达量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);各组治疗28d后与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05);高剂量祛积通络组与抗VEGF组相比,差异无统计学差异(P>0.05)。[结论]1.微血管损伤相关因子HIF1α、VEGF、VCAM-1在RVO疾病的发生中起着关键的作用。2.祛积通络方可能通过调控RVO大鼠模型视网膜组织中HIF1α、VEGF、VCAM-1的表达,起到抑制RVO疾病发生发展的作用。3.祛积通络方对HIF1α/VEGF通路的调控是从转录水平发挥作用的。