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金刚烷胺(AMD)是一种人用抗病毒药物,最早用于预防和治疗流感,也曾被用作治疗禽流感、猪流感和猪肠胃炎而广泛应用于畜禽养殖业。然而,过量的AMD会通过食物链在人体内蓄积,对人产生神经毒害并导致严重的病毒耐药性,故我国现已明令禁止其作为兽药使用。本文建立了一种新型酶联免疫吸附方法(ELISA)和一种胶体金免疫层析方法(CG-ICA),实现了对AMD的定性检测。建立的方法准确度高、特异性好、无需仪器,适合基层推广使用。在第二章中,首先合成了AMD半抗原,再通过EDC/NHS介导合成AMD人工抗原。通过质谱和紫外-可见光谱表征,分别确认了半抗原和人工抗原的成功合成。用人工抗原对小鼠进行免疫,并通过间接竞争ELISA对小鼠抗血清进行效价和抑制情况评价。在第三章中,建立了一种基于DNA碱基互补配对和非共价交联胶体(Au NPs)的新型ELISA检测AMD。将AMD单克隆抗体(m Ab)和Primer 1偶联在胶体金表面得到抗体-胶体金-Primer 1新型探针,并用于后续检测。向包被有AMD人工抗原的酶标孔中加入AMD标准品和抗体-胶体金-Primer 1金标探针,然后加入与Primer 1互补的Primer 2进行杂交配对。随后吸取上清中游离的Primer 2,先后向其中加入胶体金和Na Cl溶液,并观察胶体金溶液颜色变化,从而对体系中的AMD进行定性分析。单链DNA能提高胶体金对盐离子的耐受能力,胶体金表面的单链DNA的含量越高,胶体金对盐离子的耐受能力越强。AMD浓度的降低会引起游离Primer 2浓度的降低,使得胶体金对盐离子的耐受能力减弱,使胶体金聚集变蓝,反之胶体金溶液保持红色。当AMD人工抗原包被浓度为1.0μg/m L、Primer 1浓度为0.3μM、AMD抗体标记量为8μg/m L、Primer 2浓度为0.2μM、抗体-胶体金-Primer 1金标复合物重悬液体积为1 m L、显色用胶体金粒径为13 nm、浓度为5.8 n M时,方法灵敏度为0.033μM。本方法与AMD结构类似物和其他常见兽药均不产生交叉反应,特异性良好。在第四章中,研制了一种胶体金免疫层析检测卡对鸡肉中的AMD进行定性检测。制备了金标抗体探针,并在检测线和质控线上分别喷涂AMD人工抗原和羊抗鼠二抗。经优化,最优条件确定为:胶体金标记p H为6.5、抗体标记量为4μg/m L、T线人工抗原浓度为1.5 mg/m L、C线二抗浓度为0.6 mg/m L、结合垫上金标抗体的喷量为6μL/cm。在最优条件下本方法的灵敏度为1.5ng/m L,在实际样本中的检测灵敏度为5μg/kg,与结构类似物和其他常见兽药均不产生交叉反应,特异性良好。