恶性肿瘤的发病率和死亡率逐年上升，严重威胁人类健康和生命。在其发生和进展过程中，肿瘤细胞和宿主的免疫系统相互影响、相互制约，肿瘤细胞可通过多种机制逃避机体免疫系统的控制而不断生长、增殖。在免疫逃逸机制中Fas／FasL系统可能起着重要作用。 Fas是近年来发现的细胞凋亡信号受体，广泛分布于活化T、B细胞及单核细胞表面，正常组织及肿瘤细胞上亦有广泛表达。FasL为死亡因子，主要分布在活化的T细胞、NK细胞、单核细胞及免疫豁免区如眼前房、睾丸滋养细胞，多种肿瘤细胞上亦有表达。当Fas与其特异性配体FasL结合后，可以转导凋亡信号，诱导表达Fas细胞的凋亡。 正常情况下当免疫活性细胞表达的FasL与肿瘤细胞上的Fas结合后，可以杀伤肿瘤细胞，执行肿瘤免疫功能。然而研究表明肿瘤细胞常具有Fas诱导凋亡的抵抗性，且有FasL的表达。表达FasL的肿瘤细胞不仅能够逃脱免疫系统的Fas途径杀伤，还可以引起表达Fas的免疫活性细胞发生凋亡，杀伤免疫细胞，即“Fas反击”现象。但是关于“Fas反击”导致肿瘤免疫逃逸的现象及机制尚有争议。 随着人们对肿瘤免疫、肿瘤发生发展的分子机制和细胞增殖、分化及其调控规律的深入研究，肿瘤的基因治疗研究已成为目前肿瘤防治研究的一个活跃的领域。反义基因治疗即利用反义核酸与其靶基因或基因产物互补形成一种特殊的“基因封条”结构，在转录或翻译水平阻断靶基因的异常表达，促进细胞正常分化或诱导细胞凋亡，以达到治疗肿瘤的目的。 为此，本研究利用人大肠癌细胞和T淋巴细胞体外共同培养观察“Fas反击”现象，探讨肿瘤Fas／FasL途径免疫逃逸机制，并进一步采用针对FasL的反义基因治疗对策，尝试进行阻断肿瘤Fas／FasL途径免疫逃逸的实验研究。博士研究生学位论文中文摘要 本研究分为4个部分。 第一部分:首先利用免疫细胞化学、RFPCR、流式细胞术等方法对人大肠癌细胞系SW620、Lovo、Colo205和人白血病T淋巴细胞系Jurkat进行Fas下asL表达检测，结果显示SW620细胞FasL为高表达、Fas为低表达，Lovo细胞Fas/F asL皆为低表达，Colo205细胞Fas邝asL皆有中等表达，Jurkat细胞Fas为高表达、FasL为低表达;然后选用FasL为高表达的SW620细胞与Fas为高表达的Jurkat细胞体外共同培养，作为Fas邝asL功能检测的模型，并以FasL为低表达的Lov。细胞作为对照，通过乳酸脱氢酶法检测细胞毒杀伤效应，通过TUNEL法原位细胞凋亡检测和AllllexinV流式细胞术早期凋亡检测了解细胞凋亡情况，结果表明大肠癌细胞SW620能够引起T淋巴细胞Jurkat的凋亡。 第二部分:由含人FasL cDNA序列的质粒采用全同源粘性末端连接法构建重组的反义FasL真核表达载体peDNA3.1一as一hFasL质粒，经过酶切和测序鉴定构建成功。 第三部分:以脂质体为介导用反义质粒载体peDNA3 .1一as一hFasL和空质粒载体PcDNA3 .1转染人大肠癌细胞Sw620，经G418筛选获得稳定转染细胞SW620(as一hFL)和SW620(PeDNA3.l)。 第四部分:利用免疫细胞化学、W七stem blot、流式细胞术、Rl-PCR等方法检测 FasL表达，结果显示转染反义质粒的SW620(as一hFL)细胞在mRNA和蛋白水平的FasL表达较未转染对照和空载体对照皆有明显降低;对FasL功能的检测通过乳酸脱氢酶法检测细胞毒杀伤效应、TUNEL和AnnexinV流式细胞术，结果显示转染反义质粒的Sw6加(as一hFL)细胞对Jurkat细胞凋亡诱导效应较未转染对照和空载体对照有明显降低。 总之，体外实验研究表明，大肠癌细胞能够通过Fas/FasL途径诱导淋巴细胞凋亡，封闭肿瘤细胞的FasL表达可以抑制其对淋巴细胞的凋亡诱导效应，采用包括反义基因治疗在内的针对FasL的治疗手段能够取得一定的治疗效果，为进一步尝试通过阻断Fas压asL途径的肿瘤免疫逃逸来抑制肿瘤生长的治疗方法博士研究生学位论文中文摘要提供体外实验依据。