大豆异黄酮是存在于传统中药中的一种天然酚类化合物,也存在于淡豆豉中,对预防大多数慢性疾病有良好的作用。然而常规饲料中通常含有异黄酮类成分,会对该类成分的体内检测及其药代动力学过程产生影响,造成不可避免的干扰。本论文分别研究不同饲料对大豆异黄酮在大鼠体内的药代动力学的影响,建立了一种高灵敏度,高选择性的LC-MS/MS方法,同时检测大鼠血浆中的大豆苷,大豆苷元,黄豆黄苷,黄豆黄素,染料木苷,染料木素成分,并成功测定了大鼠进食常规含异黄酮饲料后体内大豆异黄酮的动态变化水平,并将其应用于该饲养条件下的大鼠给药后体内异黄酮浓度的校正,以消除常规饲料中的异黄酮成分对测定的干扰,从而应用于大鼠口服淡豆豉提取物后的大豆苷,大豆苷元,黄豆黄苷,黄豆黄素,染料木苷,染料木素药代动力学研究。并计算相关的临床前药代动力学参数,比较不同饮食对大鼠血浆中的异黄酮成分测定的影响。本课题开展了以下四个方面的研究:一、淡豆豉中六种异黄酮成分在大鼠血浆中分析方法的建立与确证本研究采用LC-MS/MS技术同时检测大鼠血浆中的六种异黄酮成分,建立了一种快速、灵敏、选择性的LC-MS/MS法同时测定进食不同饲料大鼠口服淡豆豉提取物后血浆中六种异黄酮的含量。该方法具有良好的选择性、灵敏度、精密度、准确度和线性范围,证明该方法适用于六种异黄酮成分药代动力学研究。大鼠血浆采用乙酸乙酯进行液-液萃取,以槲皮素作为内标物。色谱分析条件为反相C18柱(100 mm×3.0 mm),流动相组成为乙腈和水(含有0.1%甲酸),梯度洗脱,流速为0.4 ml/min,分析时间为13 min;电喷雾离子源,负离子(大豆苷元、大豆黄素、染料木素和黄豆黄苷)和正离子(大豆苷、染料木苷和IS)切换模式下进行多反应监测。生物样品在各自的线性范围内,线性关系良好(R>0.99),日内和日间精密度(RSD)均小于14.9%,准确度(RE)在-9.3%~14.5%之间。分析物的回收率为85.7%~117%。该方法简便、专属、灵敏,可以为检测同时存在于药物和饲料中的活性成分的药代动力学研究提供借鉴。二、淡豆豉异黄酮在进食不含异黄酮饲料的SD大鼠体内药代动力学研究利用所建立的LC-MS/MS定量分析方法测定了进食不含异黄酮饲料大鼠口服给药淡豆豉后体内大豆苷,大豆苷元,黄豆黄苷,黄豆黄素,染料木苷,染料木素的浓度,并绘制了六种大豆异黄酮药物浓度-时间曲线(即药时曲线)。根据测定浓度,采用非房室模型法估算药代动力学参数,并对药代动力学参数进行分析,用于大豆异黄酮药代动力学过程进行相关评价。三、淡豆豉异黄酮在进食常规饲料的SD大鼠体内药代动力学研究本实验提出了动态基线浓度校正的办法。利用所建立的LC-MS/MS定量分析方法测定了进食常规含异黄酮饲料的大鼠口服给药淡豆豉后体内大豆苷,大豆苷元,黄豆黄苷,黄豆黄素,染料木苷,染料木素的动态变化水平,通过在每个相应的时间点血浆浓度减去被分析物的基线浓度,用校正后的血浆浓度测定了口服给药后大鼠体内药动学研究的主要参数,从而应用于大鼠口服淡豆豉提取物后的体内大豆异黄酮的药代动力学研究。该方法简便、专属、灵敏,可以很好的去消除食源性化学成分的干扰,可以为检测同时存在于药物和饲料中的活性成分的药代动力学研究提供借鉴。四、不同进食大鼠灌胃给药淡豆豉提取物后的比较药代动力学与无异黄酮饮食喂养的大鼠相比,进食含异黄酮常规饲料的大鼠表现出不同的药动学参数,表明含异黄酮的商业食品的摄入可能会影响六种异黄酮的口服给药后大鼠体内的药动学行为。这也提示我们,不同饮食对大鼠灌胃给药淡豆豉提取物后的药代动力学的影响不可忽视。