盐藻(Dunaliella)是一种对多种环境胁迫有极强抗性的无细胞壁的单细胞真核绿藻，是己知的最耐盐的真核生物，是研究植物抗逆的模式系统，具有重要的理论和应用价值。本研究的主要工作包括以下两个部分： 首先，进行了对盐藻EST序列的大规模测定和SAGE文库的序列测定工作。为了开展大规模的测序研究，通过对不同的细菌培养、质粒抽提和测序条件的比较，建立了一套进行大规模测序工作的方法流程。在此基础上，分别测定了D.viridis的三个cDNA文库(高盐、低盐和最适生长条件)，以及.D.salina的一个cDNA文库(最适生长条件)，共计约13万条EST序列。这一数量使得盐藻EST在目前NCBI数据库的植物物种中排名上升到第15位(此前的盐藻EST数据为2,844条)。对这些序列的初步分析表明，53.54％为未知的基因。同时，我们开展了对盐藻SAGE标签文库的测序工作。已经完成了对5个不同条件下的SAGE文库的测序工作，共测定SAGE克隆29,568个。这些SAGE标签和EST数据的协同分析，将揭示大量盐藻基因表达的信息，为深入探讨盐藻的耐盐机制提供了重要线索。 其次，进行了盐藻碳酸酐酶基因家族的研究。盐藻中的碳酸酐酶(CA)被证明是一种耐盐蛋白，对它的研究有助于揭示盐藻的渗透调节机制。蛋白研究表明，盐藻中存在60kd和40kd两种CA，但目前只克隆到60kd的CA。在实验室原先克隆的一个盐藻碳酸酐酶1基因(DvCA1)的基础上，通过BAC文库筛选获得一个有别于DvCA1的BAC克隆，并进行了鸟枪法测定和序列组装。这个BAC克隆长度为58,009bp，是目前最长的盐藻基因组连续片段。通过对这一序列的分析，发现了盐藻基因组序列的一些重要特征，如序列的GC含量分布很不均匀(从39.6％～64.2％)、整条序列的8.32％为微卫星序列，31.74％为大片段的序列重复等。同时我们发现了两个CA基因和其它6个不同基因。两个CA基因呈"头对头"形式分布，分别编码60kd和40kd的蛋白。至此，在盐藻中获得了两个新的碳酸酐酶全长基因(DvCA2和DvCA3)，并通过EST数据库，获得了相应的cDNA。其中DvCA3是首次克隆的40kd类型的碳酸酐酶。