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目的本课题通过研究HSP90和SIRT3在肝癌细胞中的表达与侵袭以及两者的多态性位点与肝癌发病风险之间的相关性,旨在探讨HSP90与SIRT3二者对肝癌发生发展的影响,并通过此项群体研究发现和鉴定新的肝细胞癌易感基因,试图为肝癌易感人群的疾病预防提供新的标志物,同时也为开发和研制新的肝细胞癌临床用药提供新的靶标,以期对提高肝细胞癌的临床防治效果提供帮助。方法(1)选取在2013年1月-2015年10月期间住院的198例肝癌患者,年龄在35-76岁范围;同时采集198例体检中心健康自愿者作为对照,年龄在33-69岁间。所有受试者均基于自愿并签署知情同意书。对HSP90与SIRT3基因多态性与肝癌患病风险进行相关性分析,此外还对具有饮酒史患者与肝癌易感性进行相关性分析。(2)将p GCSIL-GFP-HSP90重组慢病毒载体转染人肝癌AMMC-7721细胞,荧光定量PCR检测转染后细胞中HSP90 m RNA的表达;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞术检测转染后对各组细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力;平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Caspase-3活性检测细胞的凋亡情况。(3)采用RNA干扰的方法沉默人肝癌细胞AMMC-7721中HSP90基因的表达获得HSP90基因沉默细胞株si HSP90-AMMC-7721,分别将野生型WT-HSP90和突变型Mut-HSP90转染si HSP90-AMMC-7721细胞;荧光定量PCR检测各组细胞SIRT3 m RNA表达;western blot法检测各组细胞SIRT3蛋白的表达。结果(1)HSP90 rs8005905与rs3742429基因多态性与肝癌的发生风险之间存在显著相关性;HSP90 rs3742429与具有饮酒史的人群的肝癌发生风险呈显著相关性。(2)上调AMMC-7721细胞中HSP90的表达后使细胞的增殖能力明显增高;流式细胞仪检测结果表明,上调细胞中HSP90的表达后对AMMC-7721细胞凋亡情况并未见显著影响;通过Transwell小室法检测结果表明上调HSP90的表达后视野平均侵袭细胞数量显著增多;平板克隆形成实验结果表明增高AMMC-7721细胞中HSP90的表达时,细胞克隆的形成能力明显上升;细胞划痕实验检测表明上调HSP90后AMMC-7721细胞的迁移性明显增强;caspase-3活性检测结果表明,上调HSP90表达后AMMC-7721细胞中caspase-3活性并未受到显著影响。(3)用荧光定量PCR以及western blot法分别对转染后各组细胞中SIRT3蛋白的表达情况进行检测,结果表明野生型HSP90转染后si HSP90-AMMC-772细胞中SIRT3m RNA和相应蛋白的表达明显降低;突变型HSP90转染后si HSP90-AMMC-7721细胞中SIRT3 m RNA和相应蛋白的表达无明显变化。结论HSP90基因多态性以及患者是否有饮酒史与肝癌的发生之间存在密切联系,且HSP90对肝癌细胞增殖、侵袭以及转移过程的促进作用可能是通过抑制SIRT3的表达实现的。