论文部分内容阅读
一、成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的克隆性免疫球蛋白和T细胞受体(Ig/TCR)基因重排模式目的:研究初诊成人ALL患者的克隆性Ig/TCR基因重排模式,为进一步利用RQ-PCR监测成人ALL患者体内的MRD奠定基础。方法:40例初诊成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的骨髓单个核细胞,依照BIOMED-2协作组制定的Ig/TCR检测方法,设计99条不同的PCR引物,分成15个混合管,通过多重PCR反应,分别检测患者体内的IgH、IgK、IgL、TCRB、TCRG、TCRD克隆性基因重排,并通过异源双链分析和基因扫描证实其克隆性。结果:在成人B系ALL患者中,Ig克隆性重排的总检出率为96%,其中IgH为86%,IgK-Kde?为14%,IgL为9%;并同时检测到TCR基因系间交叉重排,其中TCRB为19%,TCRG为77%,TCRD为55%。在成人T系ALL中,TCR克隆性重排的总检出率为100%,其中TCRB为83%,TCRG为78%,TCRD为33%;仅检测到1例患者有IgH基因系间交叉重排(6%)。两个及两个以上克隆性标志物的检出率在B和T系ALL中分别为91%(22例中20例)和89%(18例中16例)。结论:1、BIOMED-2协作组设计的15管多重PCR引物和方法,几乎可检测到成人患者体内所有占优势的克隆性T、B细胞增殖群体,方法简便、可靠、覆盖面广,适用于成人ALL患者的重排检测。2、成人ALL患者Ig/TCR基因重排模式具有一定的特点,为ALL的诊断和RQ-PCR监测MRD分子标志物的选择提供了一定的参考。二、基于Ig基因重排的实时定量PCR监测成人急性B淋巴细胞白血病患者体内的微小残留病目的:应用RQ-PCR方法检测患者的IgH基因重排,以利于成人B系ALL患者的MRD动态监测。方法:15例B系ALL患者的初诊DNA标本经PCR扩增IgH基因重排,克隆产物经基因测序、序列比对后,根据每例患者的克隆特异性序列信息,利用软件设计15条ASO引物,作为RQ-PCR检测的上游引物,合成通用的JH下游引物和TaqMan探针,对患者随访标本监测MRD靶分子。7例Ph+患者用RQ-RT-PCR同时检测BCR/ABL融合基因转录本。结果:15例患者使用ASO-PCR扩增IgH重排靶基因的敏感性从10-3~10-5范围内,荧光背景信号无或较低。动态监测表明:高危组患者诱导CR后体内所残留的白血病细胞(MRD)水平明显高于标危组患者,诱导CR后MRD>10-3的患者复发率高于MRD≤10-3的患者,MRD>10-3的患者生存时间短。另外,Ph+患者融合基因转录本的对数级变化趋势与IgH重排靶基因水平的动态变化一致。结论:1、使用ASO引物RQ-PCR方法检测IgH重排靶基因,具有敏感性高、特异性强、结果可靠等优点,可对肿瘤克隆进行准确定量。2、B系ALL患者体内IgH重排靶基因水平与临床治疗反应和疾病预后密切相关,可用于患者病情的随访监测。