虫草属真菌次级代谢产物鉴定与调控研究

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虫草属真菌作为真菌界的一大类,目前已被发现并命名的多达600种,但对其进行研究的却不足30种,而且大部分停留在分离化合物阶段,分子水平的研究很少,这些真菌生长过程中产生的次级代谢产物或者生物化学成分因具有药理作用和细胞毒性,引起科学家的广泛关注。本论文选用已经完成全基因组测序的蛹虫草和球孢虫草为对象展开研究。首先采用大孔树脂、硅胶柱、凝胶柱、HPLC等色谱技术对蛹虫草(C.militaris)子实体粗提物进行分离纯化,从中得到3个化合物。通过波谱数据分析,化合物1-3分别被鉴定为:虫草素(cordycepin),(1),色氨酸(2)和 5,5’-dibuthoxy-2,2’-bifuran(3),化合物 3 为首次从 C.militaris子实体中获得。对化合物分别进行抗菌活性测定发现,虫草素和5,5’-dibuthoxy-2,2’-bifuran对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌都有显著的抑菌活性,但是它们对酿酒酵母均未表现出明显抑菌活性。其次对丝状真菌球孢白僵菌(B.bassiana)进行研究,球孢白僵菌作为球孢虫草的无性型,它是一类广谱的昆虫致病菌,因其具有明显的杀虫作用被作为化学农药用于控制昆虫病害。实验研究一个新型的核蛋白转录因子LaeA,在白僵菌中作为一个甲基转移酶[1],影响真菌的整个生长过程。实验构建突变体菌株,将得到的球孢白僵菌WT,△LaeA,WT::LaeA 3个菌株作为供试菌进行相关研究。首先,从分子生物学角度去验证,利用血球计数板检测供试菌株的产孢量,并观测其生长表型,发现与WT相比,△LaeA,WT::LaeA都会导致菌丝生长发育和分生孢子形成不同程度的减弱,使菌株生长表型发生相应的变化。同时从次级代谢产物入手,将供试菌株置于不同的液体培养基中发酵,利用HPLC对菌株发酵液和菌丝萃取液进行检测。结果显示与WT相比,△LaeA菌株发酵液中卵胞霉素(oosporein)的产量减少,而其菌丝体中白僵菌素(beauvericin)的产量增加,但WT::LaeA菌株中几乎没有卵胞霉素和白僵菌素产生,并且其菌丝体中其他有紫外吸收的化合物明显减少。因此选用大蜡螟做生测实验,验证菌株的生物活性,却发现WT::LaeA菌株的细胞毒力高于WT菌株,所以又对卵胞霉素进行抗菌活性测试,发现卵胞霉素有抗细菌感染作用,综上研究表明△LaeA和WT::LaeA不但会影响球孢白僵菌的生长发育,也可能阻碍菌株相关基因簇的表达,从而对次级代谢产物产生明显的影响,说明LaeA是一个全局性的调控转录因子,它对其产生真菌进行多元化调控。
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