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心血管系统形成于胚胎发育极早期并为其它器官的发育、维持、修复所必需。血管生长异常可造成多种疾病。然而,由于研究对象所限,胚胎血管发育机制尚未完全阐明。斑马鱼作为近几十年来发展起来的发育生物学模式动物,不仅具有体外受精、胚胎透明、个体小、发育迅速等诸多优势,而且可以在缺乏血管系统的情况下存活4天以上,使得在小鼠中难以进行机制研究的血管发育重要基因得以在斑马鱼中被深入研究。斑马鱼因而成为心血管发育研究的理想模式动物。
在本论文的第一部分,在本实验室利用To/2转座子建立的大规模增强子诱捕转基因斑马鱼库中,我筛选到26个血管相关的转基因斑马鱼鱼系和19个脊索相关的转基因斑马鱼鱼系;通过插入位点鉴定与基因表达分析,我从26个血管相关的鱼系中得到HECW2(1 of2)、zvsg1、micall2a等6个新的或尚无功能研究的基因;同时,本论文中的鱼系“诱捕”到了hhex和ets1a2个与血管与血细胞前体的发育相关的重要基因。我同时也得到6个脊索相关的基因。本论文的结果证实增强子诱捕是一个快速获得大量组织特异的转基因鱼系以及鉴定新基因的方法。利用这些转基因鱼系可以观察成血管细胞的起源、分化、基因表达调控,进行小分子药物筛选等重要研究;对于筛选得到的新基因,可以进一步研究其在血管发育中的功能。
在本论文的第二部分,我从筛选到的mp805a鱼系及其诱捕到的micall2a基因入手,对该基因所属的mical家族的表达与功能进行了初步研究。已有的研究显示,Mical家族成员通常表达在中枢神经系统和肌肉中。最近发表在Nature的一篇论文报道,在神经轴突引导过程中,果蝇Mical将Semaphorin-Plexin的排斥信号直接传递给F-actin骨架,首次提出了胞外信号引起细胞骨架改变的机制。为了研究mical家族是否在的血管发育过程中起作用,本论文首先对斑马鱼mical家族的所有成员进行了组成分析与原位杂交表达谱分析,鉴定得到全部8个成员并发现只有micall2a在血管中特异表达,暗示Mical家族在血管的发育或功能中有可能具有类似于在神经轴突引导中发挥的重要作用。接着,本论文进而对micall2a基因进行了初步的功能研究。利用反义核酸类似物morpholino抑制斑马鱼micall2a的表达,造成斑马鱼早期胚胎发育严重受阻,暗示micall2a有可能对斑马鱼早期胚胎发育具有重要作用。这部分工作同时整理了NCBI和ensembl关于Mical家族的不完整的信息,并利用进化树分析为其家族成员命名。这部分工作为尚属新兴的mical基因家族的研究提供了必要的信息,同时为研究血管发育与细胞骨架的关系提供了可能的切入点与基础。