【摘 要】
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漆酶（E.C.1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶。由于其广泛的底物专一性,且产物只有水的生成,漆酶已被用于许多生物技术应用,包括多酚类污染物的降解、生产基于漆酶的生物传感器和有机材料、各种木质素相关化合物的转化、纸浆漂白、饮料加工、染料脱色和纺织废水等。目前商品化的漆酶均来自于真菌,但真菌漆酶在一些条件下不稳定,如高温、碱性等条件,因此其应用受到了一定的限制。相较之下,大多数细菌漆酶可以在较
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漆酶（E.C.1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶。由于其广泛的底物专一性,且产物只有水的生成,漆酶已被用于许多生物技术应用,包括多酚类污染物的降解、生产基于漆酶的生物传感器和有机材料、各种木质素相关化合物的转化、纸浆漂白、饮料加工、染料脱色和纺织废水等。目前商品化的漆酶均来自于真菌,但真菌漆酶在一些条件下不稳定,如高温、碱性等条件,因此其应用受到了一定的限制。相较之下,大多数细菌漆酶可以在较高的温度和较宽的p H范围内发挥作用,这有利于其在工业上的应用。因此,细菌漆酶的发现和研究具有显著的意义。本研究的主要内容及结果如下:（1）从Bacillus pumilus TCCC 11568中获得了一个新型的漆酶基因lac,片段长度为1530 bp,编码509个氨基酸。同源建模获得漆酶（LAC）的三维结构,其活性中心为T1Cu（His419、Cys492、His497和Met502）、T2Cu（His103和His422）和T3Cu（His105、His151、His493和His153、His424、His491）。（2）利用大肠杆菌制备重组漆酶（rLAC）,对其酶学性质进行分析可知,rLAC最适温度为80°C、最适p H值为6.0;rLAC在0-60°C、p H3.0-10.0范围内具有良好的稳定性;rLAC活性几乎不受金属离子K+、Ca2+、Cu2+、Mg2+、Zn2+、Ba2+、Ni2+、Fe2+影响。（3）通过分子动力学模拟研究rLAC的耐热机制,结果表明:与50°C时的三级结构相比,rLAC在80°C条件下保持了结构的完整性,同时整体的构象形成了一个更为开放的通道,这有助于底物与活性位点的结合,使得结合能升高。（4）利用rLAC降解双酚A（BPA）,确定了5个降解中间产物:苯甲酸、对苯二酚、对羟基苯乙酸、对羟基苯丙酮和3,4-二甲基苯甲酸。（5）利用毕赤酵母展示了LAC,制备LAC全细胞催化剂（d LAC）,用d LAC对BPA进行降解,重复使用4次后与初始BPA的降解率相比仍具有60%的相对降解率,因此d LAC全细胞催化剂至少可以重复使用4次。
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