IL-33及其受体ST2在食管腺癌中的表达及其对食管腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

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目的:  探究IL-33及其特异性受体ST2在食管腺癌组织及食管腺癌细胞的表达及其对食管腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,探索可否通过干预IL-33/ST2途径为食管腺癌的防治提供新的策略。  方法:  1.采用免疫组织化学法(IHC)、实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测IL-33、ST2在食管腺癌组织及癌旁正常食管上皮组织,以及食管腺癌细胞株OE33及正常食管上皮细胞株HEEC中的表达:(1)对食管腺癌组织及正常食管上皮组织进行免疫组织化学染色,根据组织显色强度及范围进行评分,比较食管腺癌组织及正常食管上皮组织中IL-33、ST2的表达差异;(2)用TRIzol法提取食管腺癌组织、正常食管上皮组织以及OE33、HEEC细胞中的总RNA,运用RT-qPCR检测IL-33mRNA的表达量;(3)提取食管腺癌组织、正常食管上皮组织以及OE33、HEEC细胞的蛋白质,运用Western blot检测IL-33、ST2蛋白表达水平。  2.IL-33的表达与患者临床病理及预后之间的关系:(1)利用包含食管腺癌及癌旁正常食管上皮组织的组织芯片分析IL-33的表达强度与各项肿瘤参数:患者年龄、性别、病理分期分级(如肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移)的相关性;(2)通过Kaplan-meier生存曲线分析IL-33的表达强度与患者预后之间的关系。  3.细胞功能实验探究外源性IL-33对食管腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响:(1)CCK-8试验检测IL-33对食管腺癌细胞生长增殖的影响;(2)划痕实验观察IL-33对食管腺癌细胞迁移能力的影响;(3)Transwell实验观察IL-33对食管腺癌细胞侵袭能力的影响;(4)利用sST2(ST2中和抗体)阻断IL-33/ST2途径后,观察对以上实验结果的影响;(5)Western blot检测IL-33对食管腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。  结果:  1.免疫组化结果显示IL-33及ST2在食管腺癌组织中的表达明显高于正常食管上皮组织,IL-33主要表达于肿瘤细胞胞浆,在正常食管上皮细胞中主要表达于胞核;ST2在食管腺癌及正常组织中均表达于胞浆及胞膜,其在腺癌组织中表达更高;RT-qPCR结果表明IL-33的mRNA水平在食管腺癌组织中的表达高于正常食管上皮组织,同样在食管腺癌细胞株OE33的表达高于正常食管上皮细胞株HEEC;Western blot结果表明IL-33及ST2的蛋白水平在食管腺癌组织及食管腺癌细胞中的表达明显高于正常食管上皮组织及正常食管上皮细胞。  2.分析包含64例食管腺癌及癌旁组织的组织芯片结果发现IL-33的高表达与食管腺癌T1-2分级、中高分化程度呈正相关;生存曲线分析显示IL-33的表达与患者累积生存率无明显的相关性。  3.体外细胞学实验发现外源性给予IL-33能够促进食管腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,这些作用可被sST2阻断;且IL-33能够诱导食管腺癌细胞上皮间质转化。  结论:  IL-33及其受体ST2在食管腺癌中高表达,IL-33/ST2途径可促进食管腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,参与肿瘤的发生与发展。
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