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我国是核桃的起源地之一,甘肃为我国核桃原产地域之一,种质资源十分丰富,存在许多特异种质资源。但由于长期实生繁殖,品种命名标准不一,造成品种资源底码不清,同名异物或同物异名现象严重,给核桃资源研究、保存、评价、利用及新种质的创新等带来很大困难。尽管前人利用分子标记对核桃也进行了一些研究,但利用AFLP技术对核桃进行研究的报道寥寥无几。本研究建立了较稳定的核桃AFLP反应体系,构建了69份核桃材料的指纹图谱,分析了其遗传多样性,以期为核桃品种鉴定、亲缘关系分析、高密度遗传图谱构建、核心种质构建等奠定基础。主要研究结果如下:1.从8种植物基因组DNA提取方法中筛选出适合核桃AFLP分析的DNA提取方法——改良CTAB法Ⅲ。采用该方法进行核桃叶片DNA的提取,方便快捷,并且能提出完全适合AFLP标记技术所需的高质量DNA。2.通过对核桃AFLP反应体系进行系统研究,建立了适于核桃AFLP分析的最佳体系。在20μL酶切体系中,包括纯化后的基因组DNA500ng,EcoRI(NEB公司) 6U,MseI(NEB公司) 3U,37℃水浴酶切5h;酶切后,加入5uL连接混合液,其中包括:MseI adapter(50pmol.uL-1) 1.0μL,EcoRI adapter(5pmol.μL-1) 1.0μL,ATP (10mmol.μL-1) 1.6μL,T4DNAligase(10U.μL-1) 0.13μL,T4Buffer 0.5μL,在恒温槽中16℃保温10h以上或过夜;连接完成后,将连接产物置于设定在65℃下PCR内变性10min,以去除连接酶的活性。之后,连接产物稀释20倍进行预扩增;预扩产物稀释20倍进行选择性扩增;20μL预扩增和选择性扩增体系中包括:稀释后模板DNA 5μL,TaqDNApolymerase(5U.μL-1) 0.3μL,MgCl2(25mM) 1.2μL,MseI primer(50ng.uL-1) 1.2μL,EcoRI primer(50ng.μL-1) 1.2U。选择扩增产物加入10μL LoadingBuffer,95℃变性10min后,在6%变性聚丙烯酞胺凝胶上进行电泳分析;银染法检测PCR产物。3.从81对引物组合中选出8对谱带较清晰、多态性较高的引物组合,对69份供试样品进行扩增分析,共扩增出438条电泳谱带,其中399条为多态性带,多态性比率为91.10%。4.使用NTSYSpc-2.10e软件,利用UPGMA法对供试材料进行聚类,建立了69份甘肃地方核桃资源的AFLP聚类图。对其遗传多样性进行了分析,揭示了甘肃地方核桃资源间遗传背景的相似性及复杂性。进一步证明了甘肃为我国核桃原产地域之一。