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多种因素参与了哮喘气道炎症，包括各种抗原、炎症介质及细胞因子等。在气道炎症发生的同时伴有气道重塑(airway remodelling)的进行，因此，气道重塑是哮喘发生的早期病理变化之一。气道重塑包括气道上皮的增厚及脱落、上皮下胶原沉积、ASMC的增生肥大以及粘膜下血管的重新分布和塑形。其中ASMC的增生和肥大是参与气道重塑的主要因素之一。ASMC增生与支气管反应性增高及不可逆气流阻塞关系密切，抑制ASMC增殖对哮喘治疗有积极作用。 炎症介质及细胞因子对ASMC的刺激要经过不同途径的信号转导，将细胞外信号传递到细胞内，启动或抑制各种基因的表达，最终启动细胞周期。原癌基因是细胞内信号转导的最后共同通道，抑制原癌基因的表达可抑制ASMC的增殖与分化。 反义核酸可干扰基因产物的表达，是基因治疗的有效方法。已有研究表明反义c-myc寡核苷酸可抑制血管平滑肌、血管内皮及肝细胞增殖，抑制c-Myc及PCNA的表达。利用腺病毒载体将反义蛋白激酶-C导入ASMC可抑制细胞增殖。静脉注射反义IL-5寡核苷酸可抑制抗原诱导的气道嗜酸性粒 第四军医大学博士学位论文 细胞浸润，同时降低气道反应性。为观察反义C－p C对ASMC增殖的影响， 本研究如下： 一、反义C－刀wC寡核旮酸对大鼠ASMC增殖的影响 合成反义C－my C寡核昔酸，利用阳离子脂质体将反义C－以w寡核昔酸导 入大鼠ASMC，MTT法测定细胞生长，RTICR检测c－pc mRNA的表达， 免疫组织化学染色检测C－MyC的表达。结果表明反义C－m丁C寡核昔酸可抑制 大V’””增殖，且这种抑制作用可持续到反义c－mxc寡核昔酸作用后第六 天。反义C－川飞C寡核昔酸的这种抑制作用具有剂量依赖性，随剂量的增大， 抑制作用明显增强。反义c－mxc寡核昔酸可降低ASMC c－mxc mRNA的转录 并抑制 ASMC C－MyC蛋白的表达。 二、反义C－＊C寡核旮酸抑制大鼠ASMC增殖与细胞凋亡的关系 将反义C－m吵C寡核昔酸导入大鼠ASMC，反义C－p C寡核昔酸可抑制大 鼠ASMC增殖，通过细胞染色观察凋亡小体的形成，流式细胞技术检测凋 亡峰的出现，细胞总DNA琼脂糖电泳检测凋亡特有电泳图谱，免疫组织化 学染色显示凋亡相关基因产物Bax及BclZ的表达。结果显示反义c－叮K寡 核昔酸导入大鼠ASMC后72 h无凋亡小体形成，流式细胞技术没有检测到 凋亡峰的出现，没有观察到典型的梯状凋亡图谱，免疫组织化学染色显示凋 亡相关基因产物Bax及Bcl2在各组表达无明显差异。反义c－m丁c寡核苦酸 抑制大鼠ASMC增殖与细胞凋亡无关。 三、反义C－刀wC真核表达载体的构建与大鼠ASMC增殖 克隆大鼠正义、反义C－my C片段，并构建大鼠反义及正义C－m吵C真核表 达载体，将所得载体导人大鼠ASMC，MTT法测定其对细胞生长的影响， 流式细胞技术观察反义及正义C－my C真核表达载体对细胞周期的影响，免疫 组织化学染色检测C－MyC的表达。结果显示反义C－p C真核表达载体可抑制 大鼠ASMC增殖，延长细胞S期并抑制C－MyC的表达。 四、反义C－＊C重组腺病毒载体的构建与大鼠ASMC增殖 6 第四军医大学博士学位论文 构建大鼠反义及正义 C－m丁C细菌质粒，并将所得细菌质粒及腺病毒 EI缺夫质粒导入293细胞系，经共转染得到正义及反义重组腺病毒载体。MTT法检测重组腺病毒载体对大鼠ASMC增殖的抑制作用，免疫组织化学染色检测重组腺病毒载体对C－MyC蛋白的表达。结果显示反义C－m少C重组腺病毒载体可抑制大鼠ASMC增殖，抑制c－Myc的表达。