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新研制出一种简易型色谱柱并通过装填大颗粒的疏水色谱填料对色谱柱的性能进行了考察。以溶菌酶为模型蛋白,通过实验发现其质量回收率和活性回收率分别达到96.6±1.3%和101.1±6.0%。同时将该简易型色谱柱应用于重组人干扰素-γ、猪心中细胞色素C以及粗α-淀粉酶的纯化并同时复性,都得到了满意的结果。全文包括四部分: 1、简易型变性蛋白复性并同时纯化色谱柱的研制及其对溶菌酶的复性 根据生物大分子分离的短柱理论和溶质的计量置换保留理论(SDT-R),特设计出一种简易型变性蛋白复性并同时纯化色谱柱,简称简易型色谱柱。该色谱柱采用易加工的塑料做柱管并以大颗粒的硅胶填料为固定相使得这种柱子的成本大大降低,此外,还因柱压小,操作简单可以在没有色谱仪等配套设备的条件下使用。通过对标准蛋白的分离以及对变性溶菌酶的复性研究证明这种简易型色谱柱有很好的分离效果,复性效率以及高的质量回收率和活性回收率。 2、简易型变性蛋白复性并同时纯化色谱柱对重组人干扰素-γ的复性及同时纯化 用装填有大颗粒疏水填料的简易型色谱柱对重组人干扰素-γ进行了复性并同时纯化,实验中对重组人干扰素-γ的盐酸胍提取液进行复性并同时纯化的色谱条件进行了优化,结果发现非线性洗脱模式效果最好,在50min内其一步纯化得到的纯度为94%,比活达到3.2×108IU·mg-1。 3、简易型变性蛋白复性并同时纯化色谱柱对猪心中细胞色素C纯化 用疏水型简易型色谱柱对猪心中的细胞色素C进行了纯化,该方法省去了传统方法中一系列的前处理步骤,对市售的猪心样进行简单的提取后直接进样,一步处理得到细胞色素C的纯度为95%,质量回收率为96.2%。整个过程步骤少,操作简单,质量回收率高。4、简易型变性蛋白复性及同时纯化色谱柱对粗a-淀粉酶的纯化 用简易型疏水色谱柱对粗a一淀粉酶进行了纯化,并对操作条件进行了优化,该方法操作简单,快速,纯化效率高,但所得到的a一淀粉酶的活性回收率不是很高,对如何进一步提高活性回收率有待进一步研究。