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磷化氢(PH3)是世界范围内使用最普遍的储粮害虫熏蒸剂,具有穿透性强、扩散性好、成本低廉、使用方便、残留少等优点。然而由于长期、单一的使用以及使用过程中一些不规范的操作,导致储粮害虫对磷化氢产生了严重的抗药性。本文针对储粮害虫磷化氢抗性越来越强,严重危害储粮安全,以及造成巨大经济损失的现实问题,以重要储粮害虫赤拟谷盗作为研究对象,测定来自我国不同地区的储粮害虫对磷化氢和空仓熏蒸剂(敌敌畏)的抗性水平,通过酶活性测定方法研究超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和细胞色素P450酶与磷化氢抗性的关系,最后利用基因定量技术研究赤拟谷盗2条P450基因(CYP345A1和CYP345A2)介导磷化氢抗性的分子机理,其研究结果如下:1.我国不同地区赤拟谷盗的磷化氢和敌敌畏抗性测定及分析采用联合国粮食及农业组织(FAO)推荐的磷化氢抗性测定方法,对来自不同地区的赤拟谷盗的磷化氢抗性水平进行测定,结果表明,16个品系的磷化氢抗性系数范围为1.7-44.4。结合实验室已有赤拟谷盗磷化氢抗性数据(12个品系),从不同地区和不同场所两个方面进行数据分析,结果表明,赤拟谷盗高抗性品系多发生于我国南方地区。就不同场所而言,赤拟谷盗高抗性的品系多发生于加工厂(面粉加工厂、大米加工厂等)和粮库,而采自农户的品系抗性水平普遍较低。采用药膜法对来自不同地区的赤拟谷盗的敌敌畏抗性水平进行测定,结果表明,16个赤拟谷盗品系的致死中浓度(LC50)值在0.044 g/L-0.110 g/L之间,相对抗性系数在2.50倍以内,表明这些赤拟谷盗对于敌敌畏的抗药性差异不大。2.赤拟谷盗超氧化物歧化酶和过氧化氢酶酶活性测定及分析采用NBT光还原法对不同品系赤拟谷盗的超氧化物歧化酶(SOD)酶活性进行测定,结果表明,25个品系的赤拟谷盗超氧化物歧化酶酶活性范围为4439.13U/μg-9098.67 U/μg。数据分析结果表明,SOD酶活性与磷化氢抗性水平之间没有显著相关性(P>0.05)。磷化氢胁迫之后,SOD酶活性随着胁迫时间延长逐渐增加,胁迫20 h后,6个品系SOD酶活性增加0.90-2.08倍。采用钼酸铵显色法对不同品系赤拟谷盗过氧化氢酶(CAT)酶活性进行测定,结果表明,CAT酶活性范围为45.51 U/μg-416.35 U/μg。数据分析结果表明,CAT酶活性与磷化氢抗性水平之间没有显著相关性(P>0.05)。磷化氢胁迫之后,CAT酶活性随着胁迫时间延长,胁迫20 h后,6个品系CAT酶活性下降为原来的0.09-0.42倍。3.赤拟谷盗细胞色素P450比活力测定及分析测定了16个赤拟谷盗品系的P450酶比活力,并结合实验室已有的12个赤拟谷盗品系P450酶比活力数据分析,结果表明,28个赤拟谷盗品系P450比活力的范围为0.81 EU of P450/μg-3.30 EU of P450/μg,抗性品系的P450比活力显著高于敏感品系(P<0.05),且随着磷化氢抗性系数的提高,P450比活力也随之提高,说明P450酶活性的提高是赤拟谷盗磷化氢抗性机理之一。4.赤拟谷盗2条P450基因的表达量测定及与磷化氢抗性的相关性分析通过实时荧光定量PCR技术测定了不同磷化氢抗性的赤拟谷盗的CYP345A1和CYP345A2基因的表达量,结果表明,CYP345A1基因的表达量范围为1.00-16.60,CYP345A2基因的表达量范围为1.00-12.05,且随着磷化氢抗性的提高,基因的表达量也随之提高。