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龙眼(DimocarpuslonganLour.)为无患子科龙眼属植物,是我国南亚热带名贵常绿果树。近年来,随着龙眼栽培面积的不断扩大,其良种繁育变得尤为重要,组织培养技术则为其提供了有效手段。而在培养过程中常会出现表面污染和外植体褐变现象,阻碍了工作的正常开展,因此能否有效克服表面污染和褐变便成了龙眼组织培养成功与否的关键。
本文以龙眼成年树茎段和实生苗为主要试材,采用二次回归旋转组合设计和随机区组等试验设计,系统地研究了龙眼离体培养再生体系的建立及在培养过程中出现的褐变现象,筛选出最佳的培养基配方和有效抑制褐变的方法,研究结果如下:
1、对成年树茎段外植体进行表面灭菌,最佳的灭菌方式为:8%NaClO20min+70%酒精1min+0.15%HgCl210min(加1-2滴吐温-80);
2、对外植体进行抗生素浸泡处理比向母树喷施抗生素的灭菌效果好,其中以青霉素和庆大霉素效果最好,用500mg·L-1的青霉素和6g·L-1的PVP溶液对外植体进行20min的振荡处理,可有效降低污染率和褐变率;
3、中等木质化程度的茎段离体培养污染率较低,且最易产生愈伤组织,最佳诱导培养基为MS+NAA(0.26~0.27mg·L-1)+BA(2.89~2.96mg·L-1)+KT(1.53~1.57mg·L-1);
4、不同浓度和种类的生长激素对外植体褐变的抑制效果不同,当BA的浓度为1.92~1.93mg·L-1、KT的浓度为0.88~0.90mg·L-1、NAA的浓度为0.05~0.06mg·L-1时,抑制效果最好,最适宜的培养条件为19℃,初期暗培养;
5、对接种后的外植体进行多次移位是抑制其褐变的有效手段,首次移位时间和最佳转瓶周期为2h;
6、褐变抑制剂对种子萌发的影响很大,以培养基中添加1.5g·L-1的PVP或1g·L-1的AC效果最好,对于成年树茎段的离体培养,添加2g·L-1的PVP对褐变的抑制效果最好;
7、对于实生苗愈伤组织的诱导,最佳诱导培养基为:MS+NAA(0.38~0.4mg·L-1)+BA(4.73~4.77mg·L-1)+KT(2.37~2.39mg·L-1),最佳继代培养基为MS+BA1mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+AC0.5g·L-1,最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg·L-1+IBA2mg·L-1;
8、TDZ对于实生苗不定芽的诱导效果显著,最佳诱导培养基为MS+TDZ0.05mg·L-1+AC0.1g·L-1。