目的：子宫颈癌是危害妇女生命健康的常见恶性肿瘤之一。全球每年约有46.6万例宫颈癌的新发病例，其中80％发生在发展中国家，它已成为发展中国家妇女死亡的主要的原因，死亡率仅次于乳腺癌，居于第二位。因宫颈癌筛查的全面开展，其发病率大大降低，但年轻妇女宫颈癌发病率有所增加。子宫颈癌的发生是涉及多种因素、多个步骤的病理过程。过去几十年里，人们从实验室到临床等不同方面进行了各种研究，但其发病机制尚未完全明了。 p16基因又称多肿瘤抑制基因(multipie tumor suppressor，MTS1)它是人们发现的第一个直接作用于细胞周期，抑制细胞分裂的基因，其在宫颈癌的发生过程中起到何种作用，已成为研究的热点。许多研究证实，在子宫颈癌发生过程中存在p16蛋白表达异常，但其表达是升高，还是降低说法不一。p16基因在子宫颈癌的发生过程中其失活的机制究竟是什么，作为在宫颈癌研究中最受人关注的抑癌基因之一，p16与宫颈癌发生之间的关系还存在许多疑问。 郑氏植物蛋白(Zhengs plant protein，ZPP)是一种从低等植物中提取的糖蛋白，具有刺激肿瘤细胞增殖的作用，研究表明它是一种与人肿瘤抗原相关的植物蛋白。郑氏植物蛋白片段(Zhengs plant protein segment，ZPPS)是邹岳奇等人经过进一步对ZPP结构以及相关基因的研究，对其继续提纯而制成。已有研究表明经131Ⅰ标记的ZPPS在小鼠恶性肿瘤放射性核素显像中的摄取明显高于正常组织，且表达速度及程度均高于131Ⅰ标记的ZPP。但ZPPS在宫颈癌组织中表达情况，还未见研究报道。本课题采用组织芯片、原位杂交及免疫组化技术研究抑癌基因p16 mRNA、P16蛋白及ZPPS在宫颈不同程度病变组织中的表达情况。探讨p16 mRNA与宫颈不同程度病变生物学行为的关系，探讨p16 mRNA的异常表达在宫颈癌的发生发展中的作用，探讨p16在蛋白水平和基因水平的表达是否相符及其在正常宫颈组织向CIN和宫颈癌发生、发展中的作用。这对于了解肿瘤的发病机制，提高宫颈肿瘤的诊断率有重要意义。 方法： 1.收集研究样本宫颈组织共247例，其中宫颈鳞癌54例，CIN组织154例，正常宫颈组织39例。 2.应用自制组织芯片技术将247例供体标本，按阵列设计顺序依次放入受体蜡块中，融合、切片、捞片、烤片制成需要的组织芯片。 3.应用免疫组织化学技术(SP法)测定宫颈鳞癌、CIN组织及正常宫颈鳞状上皮组织中ZPPS及P16INK4A的表达。 4.采用原位杂交技术检测p16 mRNA在宫颈鳞癌、CIN组织及正常宫颈鳞状上皮组织中的表达情况。 5.采用SPSS11.5统计软件进行统计学处理，以a=0.05为检验水准，当P<0.05时具有统计学差异。 结果： 1.组织芯片制备按课题需要制作6×5，7×5芯片共8张，组织点阵排列整齐，无点阵移位现象，有8个位点缺失，39个位点组织无意义，其他位点均可见足够的组织结构。组织位点的形态可观测率在83.3％～93.3％之间。 HE染色均匀，无脱片、异位和皱折。免疫组织化学染色及原位杂交，阳性定位清楚，背景干净，无掉片现象。 2.P16INK4A在子宫颈上皮不同病变中的表达采用免疫组织化学方法检测48例宫颈鳞癌、119例CIN，33例正常宫颈鳞状上皮中P16INK4A的表达。结果显示，正常宫颈鳞状上皮中P16INK4A无表达或仅在基底层部分细胞弱阳性表达。在CIN和宫颈鳞癌病例中，无论是基底层还是其他病变各层均可见细胞强阳性表达，宫颈鳞癌(93.75％)及各级别CIN(CINⅢ81.25％，CINⅡ64.10％，CINI18.75％)均明显高于正常宫颈鳞状上皮(0％)中p16表达，差异具有显著性(p<0.01.)；P16INK4A过表达在宫颈鳞癌中明显高于CIN I和CIN Ⅱ(p<0.01)；宫颈癌和CIN Ⅲ之间差异无显著性(p>0.05、)。其他各级别CIN之间P16INK4A的表达差异均有显著性(p<0.05)，且随级别增加表达增强。 3.ZPPS在宫颈上皮不同病变中的表达采用免疫组织化学方法检测48例宫颈鳞癌、119例宫颈CIN及33例正常宫颈鳞状上皮组织中ZPPS的表达。在正常宫颈鳞状上皮中，ZPPS不表达或少量表达，从正常宫颈鳞状上皮(0％)、CIN I(6.25％)、CIN Ⅱ(51.28％)、CINⅢ(58.33％)到宫颈鳞癌(72.92％)，ZPPS表达阳性细胞逐渐增多。ZPPS表达在正常宫颈上皮和CIN I中差异无显著性(p>0.05)；ZPPS在宫颈鳞癌及CIN Ⅱ、CINⅢ中均高于正常宫颈鳞状上皮表达，差异具有显著性(p<0.05)；CIN Ⅰ与正常宫颈鳞状上皮中ZPPS表达差异无显著性(p>0.05)。富颈鳞癌与CIN Ⅰ、CIN Ⅱ均差异有显著性(p<0.05)，随级别增加表达增强，但与CINⅢ之间差异无显著性(p>0.05)。 4.p16 mRNA在宫颈上皮不同病变中的表达采用原位杂交技术检测p16 mRNA在48例宫颈鳞癌、119例CIN(包括48例CINⅢ，39例CIN Ⅱ，32例CIN Ⅰ)及33例正常宫颈鳞状上皮组织中的表达。从正常宫颈鳞状上皮、 CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ到宫颈鳞癌，p16 mRNA的表达情况依次为18.18％(6/27)、43.75％(14/32)、56.41％(22/39)、75％(36/48)及79.17％(38/48)，差异具有显著性(p<0.01)。p16 mRNA阳性率在CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ及宫颈鳞癌中明显高于正常宫颈鳞状上皮(p<0.01)；宫颈鳞癌与CIN Ⅰ及CIN Ⅱ之间p16 mRNA阳性率差异具有显著性(p<0.01)。但在宫颈鳞癌和CINⅢ之间p16 mRNA表达差异无显著性(p>0.05)。 5.子宫颈鳞癌中p16 mRNA表达与ZPPS、P16INK4A表达的相关性分析在子宫颈鳞癌中p16 mRNA与P16INK4A表达具有显著正相关性(p<0.05，r=0.503)；p16 mRNA与ZPPS表达具有显著正相关性(p<0.05，r=0.380)；P16INK4A与ZPPS表达具有正相关性(p<0.05，r=0.402)。 6.子宫颈鳞癌中p16 mRNA、P16INK4A、ZPPS表达与年龄、肿瘤大小、分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及病理分级之间的关系p16mRNA、P16INK4A与临床分期有显著相关性(p<0.05)，与年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移情况及病理分级之间均无明显相关性(p>0.05)。ZPPS表达与年龄、肿瘤大小、分化程度、病理分级之间均无明显相关性(p>0.05)，与淋巴结转移之间有显著相关性(p<0.05)。 结论： 1.免疫组化方法标记P16INK4A的表达率从正常宫颈鳞状上皮、CIN到子宫颈鳞癌逐渐增高。 2.原位杂交检测p16 mRNA在正常宫颈组织中可见表达，并且随CIN级别升高到子宫颈鳞癌，p16 mRNA检出率逐渐增高。 3.子宫颈鳞癌中P16INK4A和p16 mRNA有正相关，说明p16基因在蛋白水平和mRNA水平是相符的。 4.免疫组化方法标记ZPPS的表达率从正常宫颈鳞状上皮、CIN到子宫颈鳞癌逐渐增高。 5.子宫颈鳞癌中P16INK4A过表达与ZPPS异常表达相关，二者呈正相关。提示两种蛋白的异常表达在宫颈癌的诊断过程中有协同作用，在诊断宫颈癌时可以同时进行检测。 6.p16过表达与临床分期有显著相关性，与其他各临床病理因素之间均不存在相关性。ZPPS异常表达与淋巴结转移有显著相关性。p16 mRNA与临床分期有相关性。 7.组织芯片手工制做，程序简单、经济方便，是一种简便可行，高效稳定的技术方法，能满足相关科研课题和实际工作的需要。