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谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)是生物体内抗氧化酶系的重要成员之一,它利用硒代半胱氨酸(Sec)作为催化官能团,通过谷胱甘肽(GSH)催化还原氢过氧化物,从而保护细胞免遭氧化损伤,因此,它作为抗氧化剂具有广泛的药用价值。但由于天然GPX来源有限、纯化困难和难于用DNA重组技术生产等不利因素,制备具有高GPX活力的人工模拟酶具有很高的实用价值。
我们实验室利用蛋白质工程法成功制备了鼠源单链抗体,经化学突变引入催化基团—Sec,其GPX活力接近天然兔肝的GPX活力。本文对该鼠源单链抗体进行改形,成功构建了人—鼠嵌合的人源化单链抗体库,通过DNA改组(DNAshuffling)方法,对筛选得到的阳性抗体克隆进行抗体的亲和力成熟。高亲和力的单链抗体在大肠杆菌中表达、纯化后,经化学突变制备的单链抗体酶是首例成功制备的高GPX活力的人源化GPX模拟物,作为抗氧化剂有着广阔的应用前景。