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目的:通过胃癌常用数据库生物信息学分析以及临床组织样本验证,结合体内外细胞功能实验,明确基因GRINA在胃癌(gastric cancer,GC)中表达上调与恶性进展的关系。初步探索GRINA在胃癌中表达上调及促进胃癌发生发展的分子机制。方法:1.通过GEO数据库,ONCOMINE数据库,TCGA数据库等多个含有大样本胃癌组织的国际权威数据库通过对比癌和癌旁正常组织差异表达的基因,筛选出胃癌组织较正常组织发生表达显著上调的基因GRINA。2.提取20对新鲜胃癌组织与正常组织的mRNA及蛋白,通过RT-PCR法及蛋白免疫印迹(Western blotting)法比较胃癌组织和正常组织之间GRINA的表达差异。3.搜集胃癌组织石蜡标本,构建胃癌组织芯片,通过免疫组织化学方法检测GRINA不同分级,分期胃癌中的表达情况,结合相应患者的临床病理资料及术后随访结果,比较GRINA蛋白表达与胃癌患者临床病理资料及预后的相关性。4.利用慢病毒载体构建稳转干扰GRINA的胃癌细胞株,分别检测其对胃癌细胞株的增殖、侵袭、迁移,凋亡及细胞周期的影响。5.稳转干扰GRINA的胃癌细胞株进行裸鼠皮下成瘤实验,检测GRINA在体内对胃癌增殖的影响。6.利用生物信息技术分析c-myc在转录水平上对GRINA表达的影响。7.利用染色质免疫共沉淀实验(CHIP实验)验证生物信息学分析的结果,并利用小RNA干扰技术,在胃癌细胞株中进一步验证。8.利用Western bloting检测了稳转干扰GRINA的细胞株中Bcl-2家族蛋白及细胞周期相关调控蛋白表达变化。结果:1.在GEO,ONCOMINE,TCGA数据库等多个含有大样本胃癌组织的国际权威数据库中GRINA在癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.001)。2.在20对新鲜胃癌组织和正常组织中GRINA在mRNA水平和蛋白水平上的表达均显著高于配对正常组织。3.GRINA的表达高低与胃癌的TMN分期,4.细胞增殖实验(CCK8)结果显示:与对照组相比GRINA稳定干扰胃癌细胞AGS,BGC823的增殖能力均受到显著抑制(p值均<0.01)。细胞凋亡实验(AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞分析法)结果显示GRINA稳定干扰胃癌细胞株细胞凋亡率发生显著的提高。5.划痕实验显示,与对照组比较,GRINA稳定干扰后的胃癌细胞(AGS,BGC823)均能明显抑制细胞迁移,(p值<0.01)。空穿和胶穿实验显示,GRINA稳定干扰细胞穿出transwell小室细胞数明显少于对照组,差异有显著性(p值<0.01。6.生物信息学、染色质免疫共沉淀实验及细胞实验显示在胃癌细胞中c-myc可以正向调控GRINA的表达。7.在GRINA稳定干扰细胞中,与对照组相比,Bcl-2家族促凋亡蛋白bak,bax发生明显上调,抗凋亡蛋白bcl-2,bcl-xl蛋白水平发生明显下调(p值均<0.01)。结论:1.GRINA在肿瘤组织中表达显著高于瘤旁正常组织。2.GRINA表达的高低与胃癌的临床病理特征密切相关,且表达量与胃癌病人预后显著负相关。3.GRINA在体外功能实验中促进胃癌细胞的增殖,迁移和侵袭能力并抑制胃癌细胞的凋亡。4.稳定干扰GRINA后可显著抑制胃癌细胞的裸鼠皮下成瘤能力。5.GRINA在胃癌组织中的表达与癌基因c-myc显著正相关,其表达上调在转录水平上受c-myc蛋白的正向调控。6.通过调控Bcl-2家族蛋白及细胞周期相关调控蛋白的表达GRINA实现在胃癌中促进增殖抑制凋亡的作用。