论文部分内容阅读
背景:结肠癌作为我国第三大癌症,发病率和死亡率逐年上升,传统治疗方法为手术治疗辅以化疗等,但化疗伴随许多副反应,包括食欲不振、贫血、免疫力下降等,严重影响患者生活质量。传统中医药在减轻药物副反应,增强疗效方面取得了不错的效果。白花蛇舌草-半边莲药对是消癌解毒方的君药,也是临床抗肿瘤治疗的常用药对。消癌解毒方是国医大师周仲瑛教授提出“癌毒”理论后,根据“祛毒即扶正”的治疗理念所拟经验方,用于治疗结肠癌术后患者。临床实践和相关文献报道均证实,白花蛇舌草和半边莲组成药对后可以协同作用,对结肠癌有极佳的治疗效果。随着现代医学的发展,关于药物作用于疾病的机制研究越来越完善,但是以单味药为主,与药对相关的研究较少。SALL4属于锌指结构转录因子,其可以调控胚胎干细胞的自我更新,并参与肿瘤发生和进展。Wnt/β-catenin信号通路是一条经典且关键的信号通路,已经被证实在多种肿瘤中异常激活,其中就包括结肠癌。目的:从分子生物学层面探索白花蛇舌草-半边莲药对抑制结肠癌细胞的具体作用机制,为中医药抗肿瘤提供科学依据,也为临床治疗其他肿瘤提供思路,以便更好地发挥中医中药的优势。研究方法:1.实验一:将两株结肠癌细胞株HCT116和HT29分为药对组(S1:B1组、S1:B2组、S2:B1组)和对照组,分别用对应含药血清处理药对组,PBS处理对照组,用CCK-8、集落形成实验、Transwell实验和流式细胞术分析白花蛇舌草-半边莲药对对结肠癌细胞的作用。2.网络药理学分析:基于网络药理学预测白花蛇舌草-半边莲药对可能作用于结肠癌的靶点和信号通路3.实验二:①基于网络药理学分析结果,用qRT-PCR、Western blot检测结肠癌样本和癌旁正常组织样本中SALL4表达量,同法检测结肠癌细胞和正常肠粘膜细胞中SALL4表达量,对收集到的病人临床病理资料和SALL4表达水平进行相关性分析。②将结肠癌细胞株分为对照组和含药血清处理组,分别用qRT-PCR、Western blot检测含药血清处理后结肠癌细胞株中SALL4的表达量。③将结肠癌细胞株分为对照组、药对处理组和药对处理+过表达SALL4组,通过回复实验(CCK-8、集落形成实验、Transwell实验和流式细胞术)验证过表达SALL4对白花蛇舌草-半边莲药对处理的回复作用。4.实验三:将结肠癌细胞株分为对照组、药对处理组和药对处理+过表达SALL4组,Western blot检测每组Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白。5.实验四:建立裸鼠皮下荷瘤模型,对瘤体进行ki67染色、TUNEL染色以及SALL4免疫组化染色;建立裸鼠体内转移模型,活体成像检测结肠癌细胞体内转移能力,对肺转移灶进行HE染色,Western blot检测皮下荷瘤的SALL4及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达。结论:1.白花蛇舌草-半边莲药对可以抑制结肠癌细胞的增殖能力及迁移侵袭能力,并促进其凋亡,当白花蛇舌草、半边莲比例为2:1时,治疗效果最佳。2.SALL4在结肠癌组织中较癌旁正常肠粘膜组织高表达,SALL4表达与患者的肿瘤大小、T分期及淋巴结转移呈正相关,白花蛇舌草-半边莲药对可以通过下调SALL4表达,抑制结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。3.白花蛇舌草-半边莲药对抑制结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡是通过下调SALL4抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。