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目的:组织离体后,由于缺血缺氧正常代谢受到干扰逐步产生一系列病理变化,细胞逐步变性,当其步入不可逆性变性阶段,组织必然坏死。因此,如何保存离断的肢体,使新陈代谢过程延缓,使变性坏死延迟到来,最大限度降低缺血所造成的组织损害、延长组织细胞的活性为临床治疗赢得时间,成为提高断肢再植成功率的关键。在现知的种种手段中低温干燥保存是保护组织活力常用的措施,应用器官保存液保存离体的器官在移植外科已广泛应用,且保存效果良好,深低温保存离体器官在临床上的相关科室已被采用,本实验通过制作大鼠的离断肢体模型,选取常规低温干燥保存、HC—A器官保存液及深低温液氮保存三种保存方法保存断肢,分别于8、24、72h通过观察血管内皮及中膜层的病理改变和超微结构改变、骨骼肌Na~+-K~+-ATP酶的活性变化三个侧面来探讨不同的保存方法对断肢的保存效果。为临床医生保存断肢提供方法上的参考及相关的理论支持。 方法:实验选用成年Wistar大鼠共45只,雌雄不限,随机分为三组,分别为常规低温干燥保存组、HC—A器官保存液低温保存组、深低温液氮保存组,每组15只大鼠。将大鼠用氯胺酮麻醉,于大腿中上1/3水平环形离断后肢,制作断肢模型,断肢左右数量相等,每组共30只断肢。将断肢分别用以上三种方法保存。常规干燥组以无菌敷料包裹,置放入冰箱中保存,保存温度控制在0~4℃。器官保存液组保存前用无菌注射器抽取HC-A保存液(4℃)行股动脉缓慢灌注,然后将其浸泡入4℃HC-A器官保存液中,置于密闭容器中保存于冰箱中,保存温度亦为0~4℃。深低温液氮保存组采用二步法保存方式,即中间温度值为-20℃保存60min后再转移到液氮中保存,实验时采用37℃温水浴的方式复温。各组分别于保存8、24、72h后取标本观测各指标。取股血管制作病理切片观察血管内皮及中膜层细胞的变性、坏死情况,并进行盲法观察者半定量记分的方法记录观察结果进行统计分析,同时制作电镜标本观察内皮和中膜层细胞超微结构改变。取股三