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目的:疟疾是一个世界性的公共卫生问题,来源于疟原虫属的寄生虫是疾病的病原基础。据2017世界卫生组织的疟疾报告,调查91个城市共计有2.16亿例疟疾感染患者及超过445000例死亡患者,疟疾感染病例相比往年增加了五百万。其中间日疟分布广泛,主要在亚洲和太平洋地区流行。目前,间日疟是全球疟疾科研人员致力于的重要疾病,在间日疟原虫感染过程中免疫应答特点分析及其与疾病临床表现的相关性的研究将更有利于揭示疟原虫的致病机制,并为制备有效疫苗和新的防治策略提供有力线索。而疟原虫感染宿主体内趋化因子/细胞因子变化模式分析必将为科研人员提供了一个新方向。疟原虫进入机体后引起免疫应答涉及一系列的免疫细胞的参与,趋化因子和细胞因子对免疫细胞的募集及功能的调节显得至关重要。趋化因子是一个约8-14kDa的低分子多肽家族,它能通过七次跨膜G蛋白偶联受体(GPCRs)发出信号;基于保守的半胱氨酸残基的N末端附近的相对位置不同,趋化因子分为CC、CXC、C和CX3C亚族。大量研究表明,趋化因子在疟原虫侵入人体的过程中发挥着重要生物学功能。细胞因子是一类小分子多肽/糖蛋白,由细胞产生,具有多种生物学功能,例IL-2,IL-6,IL-10。IL-2是重要的T细胞促增殖因子,能诱导Th0向Th1分化,IL-2,IFN-γ,IL-12主要作用于Th1型细胞,从而介导细胞免疫应答反应。IL-4和IL-10等细胞因子则主要介导Th2型免疫反应,促进B细胞分化为浆细胞,产生相关抗体。IL-1β,IL-6,TNF-α均为巨噬细胞产生的前炎症性细胞因子,可引起发热和炎症等临床反应。间日疟的调查研究进程相比恶性疟缓慢,但这种情况在科技进步及我们对间日疟造成全球性疟疾的意识提高后得到了改变。相对于恶性疟严重的临床表现和死亡率,间日疟显得没那么重要,但间日疟原虫有休眠生命周期阶段,它能驻留在感染宿主的肝脏内,这使它难以被大多数抗疟药或宿主的免疫系统清除,而这一部分无临床症状体内却还存在间日疟原虫的人群,可作为携带者继续传播疟疾,这使疟疾工作有很大挑战。在中国境内,疟疾高发地区主要位于云南、海南、广西等地方,特别是在中国边境疟疾的流行与缅甸国际边境疟疾有很强的相关性。近年来,中缅旅游业大力发展,中缅边境的疟疾感染情况很可能影响到国内的疟疾感染状况。中缅边境是间日疟的高发地区,大量的疟疾患者,当地无症状感染者,曾感染人群及其多样化的地理环境对疟疾流行区调查有很大意义。2015年我们在云南与缅甸边界进行流行病学调查,并收集了大量的当地疫区患者血浆样本,拟通过悬液芯片技术检测该流行区多种疟疾相关的趋化因子和细胞因子的表达,经统计学方法联合分析各检测指标与患者基本资料的相关性和各因子之间的内在关系,将为间日疟原虫的防控提供有力线索。研究方法:2015年我们在云南与缅甸边界进行间日疟的流行病学调查。(1)样本收集:在符合伦理标准前提下,得到参与者知情同意权后,由医学相关专业人员采集参与者的血液样本,记录基本信息,制备血涂片,镜检确定原虫感染类型和感染率,同时分离血浆样本,-80度保存。(2)实验分组:流行区正常对照组(EC):30例无症状P.v感染者(Asym):38例症状性P.v感染患者(Symp):92例(3)采用悬液芯片技术测定血浆样本中趋化因子和细胞因子的表达:按说明书要求,将偶联不同检测指标抗体的磁珠加入96孔板中,清洗后,每孔加入4倍稀释的血浆样本和标准品,封膜避光振荡孵育1小时;孵育后,用洗液洗板三次,每孔加入检测抗体,封膜避光振荡孵育30分钟;再次洗板后,加入PE染液,避光振荡15分钟后。每孔加入125ul分析缓冲液,震荡30秒,上机检测。(4)统计学分析:实验数据经Bioplex Manager(Bio-Rad Version 4.0)软件进行处理,根据标准曲线换算各检测指标的浓度值。应用统计软件SPSS 13.0,R软件,SPSS.11和GraphPad prism 5对样本数据进行统计学分析。经验证后实验数据并不服从正态分布,方差不齐,由此采用非参数统计方法分析。统计方法中,两组比较用Mann-Whitney U检验,多组比较用one-way Kruskal-Wallis检验。同时采用Spearman相关性分析和正交校正的偏最小二乘分析(OPLS)进一步分析各因子之间以及因子与疾病之间的内在关系。结果:1.在中缅边界地区,间日疟原虫感染引起患者中多种趋化因子/细胞因子的水平改变,并且这些趋化因子/细胞因子高度相关。2.IL-10,CCL27,CX3CL1,CXCL9,CXCL11和CXCL13可以作为鉴定间日疟感染的关键因子。3.CCL23,CCL8,CXCL10,CXCL16,TNF-a及IL-6可作为疟疾感染症状相关的生物标志,其表达多与患者原虫血症水平和体温呈正相关。4.CCL22水平作为筛查无症状感染者的关键指标,其表达水平与感染者年龄呈负相关。结论:2015年在中缅边境疟疾流行区开展间日疟原虫感染宿主免疫状态调查,通过悬液芯片技术确定间日疟感染的关键性趋化因子/细胞因子,和无症状感染者的生物学标志,为进一步制定间日疟的防控措施提供新的依据。