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结核病(Tuberculosis,TB)是一种世界范围内的流行性致死疾病,每年新感染病人高达100万人。然而,多药耐药型结核(multi-drug resistant TB,MDR-TB)的出现和流行严重地阻碍了结核的控制和治疗进程。目前仅有极少数的药物能用于MDR-TB的治疗,所以我们的研究目的是从特殊生境微生物中发现能够对结核治疗,特别是能用于耐药型结核控制的新型活性次级代谢产物。本论文从日前广泛应用的不同次级代谢产物发现方法出发,构建了一个结合单菌多次级代谢产物(one strain many compounds,OSMAC)、NMR指纹图谱以及主成分分析(principal component analysis,PCA)等多重策略的复合手段作为有效的从微生物中鉴定抗结核代谢产物的研究手段。 本论文的研究基础是利用实验室构建的以牛型分枝杆菌Mycobacteria bovis BCG为细菌模型的高通量模型进行的活性筛选。首先,将654株放线菌进行天然产物构建共形成2562个粗提物,对粗提物进行抗BCG活性筛选共获得415个活性样品,经过对活性菌株的多方位评价最终挑选14株极端生境微生物进行后续研究。 论文以激活微生物沉默基因表达为目的,建立了一个有效的包含OSMAC、NMR指纹图谱和PCA等方法的针对微生物次级代谢产物的综合研究策略,并对13株极端生境放线菌进行了相关研究。最终从4160个fractions中的37个潜力fractions选择了3个最强活性的流份进行了后续研究,共得到20个靶标化合物。其中从沙漠放线菌LS120194的相应fraction中获得一个具有罕见结构骨架的新化合物,且其对BCG的抑制活性甚至高于阳性对照异烟肼,MIC值为0.14μM,显示了该化合物成为新一代抗结核候选药物的极高潜力。 在不同培养基条件的OSMAC策略指导下,本论文还对一株植物内生菌Y3111进行了化学成分研究。最终从该菌种获得6个pluramycin类的葸醌化合物,其中4个化合物为新化合物。新化合物的结构鉴定是基于对其NMR和MS数据的分析完成的,对化合物的活性测试发现其中3个化合物具有不同程度的抑菌活性。 对获得的26个化合物进行的Rule of five和ChemGPS-NP物理化学性质评价结果显示大多数的化合物都具有优秀的成药性,且与目前的抗TB药物处于相似的理化空间内。其中在物理化学性质方面极具优势的化合物将可能成为后续的抗结核药物研发重点。