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目的：紫花地丁最早见于《备急千金要方》,具有清热解毒,凉血消肿之功效。长期以来,被冠以“地丁”之名者众多,如“甜地丁”为豆科的小米口袋(Gueldenstaedtia pauciflora(Pal1.)Fish.);“苦地丁”为罂粟科紫堇(Corydalis edulis Maxim.);"广地丁”为龙胆科植物华南龙胆(Gentiania loureiri(D.Don)Griseb.)。《中国药典》(2010年版)规定紫花地丁为堇菜科堇菜属植物紫花地丁(Viola yedoensis Makino)。由于该属多种植物外形以及地区性习惯用药等原因,紫花地丁的品种比较混乱。全国常见的紫花地丁同属混伪品有：早开堇菜(V.prionantha Bunge)、东北堇菜(V.mandshurica Beck.)、白花堇菜(V.patriniDC.)、戟叶堇菜(V.betonicifolia J.E. Smith)、尼泊尔堇菜(V.betonicifolia J.E.Smith subsp.Nepalensis(Ging)Beck.)、长萼堇菜(V.inconspicua Bl.)、犁头草(V.concordifolia C.Wang.)等。由于堇菜属分布广种类多,辨识难度极大,利用传统的中药鉴定手段很难进行区分。ITS区在DNA的核心区域,一般不会受到物理条件的变化如药材加工等而改变,已经被大量应用于各种基因水平的鉴别,效果较好,一般都能提供药物的基本系统学信息。在本次关于紫花地丁鉴别的研究中,随机选取了四川省三个城市作为研究地点,并在随机的原则下对三地的市场售地丁药材的性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定以及基于ITS序列的分子鉴定,确定四川市场的地丁来源以及找到有效快捷的鉴定方法。方法：(1)收集四川省成都、泸州、自贡等3地9个药房的紫花地丁药材,对其进行性状鉴别；(2)利用显微技术对9个样品进行显微分析确定样品的品种；(3)利用薄层色谱和荧光鉴别法对9个样品做理化鉴定；(4)通过以上途径判断出四川省常见紫花地丁来源后,对紫花地丁与其同属易混材料,在DNA的ITS水平进行序列分析,首先发现混伪品药材与紫花地丁在ITS序列上的不同,然后再进一步找出正品紫花地丁与伪品在ITS序列上最显著的鉴别点。结果：(1)在形态鉴定中样品1、样品3、样品5、样品8性状表现一致,后经显微以及理化鉴定均为正品紫花地丁；样品2大部分为犁头草；样品4为心叶堇菜；样品6为长萼堇菜；样品7大部分为长萼堇菜,有少量正品紫花地丁,样品9为正品紫花地丁与犁头草的混合物。在显微鉴定中样品1、3、5、8、9表现出相同的显微特征；样品2与样品9的小部分显微一致；样品4具有独自的显微特征；样品6与样品7的大部分具有相同的显微特征。在正品紫花地丁与其同属的混伪品在薄层鉴别法中都表现出两个相同荧光斑点。荧光鉴别中结果显示紫花地丁、心叶堇菜以及以紫花地丁为主混有犁头草的样品显亮蓝色荧光斑点；犁头草、长萼堇菜、以长萼堇菜为主混有少量紫花地丁的样品显蓝色荧光样品。四川药房中常见的地丁来源有紫花地丁、长萼堇菜、犁头草、心叶堇菜等4种堇菜属植物。(2)紫花地丁、长萼堇菜、犁头草、心叶堇菜、紫花蔓地丁等5种堇菜属植物在ITS1和ITS2区段存在较多碱基差异,其中能将紫花地丁正品区别开的特异鉴别位点共8个。结论：根据性状特征、显微特征以及ITS序列特征可以区分紫花地丁和其他易混中药材。ITS序列是紫花地丁鉴定的有效的分子标记。