牙鲆是我国一种重要的经济鱼类。随着经济的快速发展,牙鲆的养殖产量不断提高,病害问题也随之加重。淋巴细胞抗原6（Lymphocyte antigen 6,Ly6）家族成员既参与先天性免疫又参与获得性免疫,在免疫系统中发挥重要作用。Ly6家族成员之间的同源性较低,其功能也存在差异。Ly6家族的核心成员Ly-6D在硬骨鱼中的功能完全未知。本论文对牙鲆（Paralichthys olivaceus）Ly-6D（PoLy-6D）进行了克隆鉴定,并对其生物学功能进行了初步研究。序列分析结果显示,PoLy-6D的开放阅读框（Open reading frame,ORF）为300 bp,编码99个氨基酸,其中前19个氨基酸为信号肽序列。PoLy-6D缺乏糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定结构,预测是一种分泌蛋白。三维结构分析显示PoLy-6D的空间结构与人CD59的空间结构类似,都是由三个β折叠片和一个α螺旋组成的三指结构。这些结果暗示了PoLy-6D与CD59可能有某些类似功能。为了进一步探究PoLy-6D的功能,我们对其进行了体外原核表达。结果显示重组蛋白PoLy-6D（r PoLy-6D）抑制了牙鲆血清对兔红血细胞的裂解作用,可能抑制了牙鲆血清对补体的活化。同时我们发现r PoLy-6D能降低血清的杀菌活性,但是对不同细菌其抑制血清杀菌活性的作用不同。我们的结果表明对条件致病菌如藤黄微球菌（Micrococcus luteus）和荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）,r PoLy-6D可以显著降低血清的杀菌活性,但是对E.piscicida无明显效应。而且将血清中的PoLy-6D阻断后,这两种菌在血清中的存活率显著降低。这些结果揭示了PoLy-6D有调节补体的作用。此外我们发现r PoLy-6D还可以与多种细菌结合,但是没有抗菌活性,这表明PoLy-6D可能作为病原体的识别受体参与宿主对病原体的清除。接下来我们对PoLy-6D进行了表达谱分析。组织特异性检测结果显示PoLy-6D在健康牙鲆的8个检测组织（肌肉、血、脾、头肾、鳃、肝、心和肠）中均有表达,其中在脾脏中的表达量最高,其次是头肾,在肠中的表达量最低。当用胞内致病菌杀鱼爱德华氏菌（Edwardsiella piscicida）侵染牙鲆时,PoLy-6D的表达呈上调趋势,但是用胞外致病菌鳗弧菌（Vibrio anguillarum）以及传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）病原体侵染牙鲆时,PoLy-6D在肝、脾和头肾的表达整体呈下调趋势。在不同的微生物侵染下,PoLy-6D在不同的免疫组织中表达水平发生变化提示我们PoLy-6D可能参与了机体的抗病感染免疫。为了进一步探究PoLy-6D是否在体内参与宿主对病原体的清除,我们构建了体内过表达载体。确定PoLy-6D在体内过表达后,用杀鱼爱德华氏菌侵染牙鲆,实验结果显示过表达PoLy-6D的牙鲆免疫器官中的细菌数量明显下降。说明PoLy-6D过表达可以增强宿主对E.piscicida的抵抗作用,即PoLy-6D参与了牙鲆的免疫应答过程。综上所述,本研究发现PoLy-6D是一种新的补体抑制剂。体内过表达PoLy-6D可以提高宿主对病原菌感染的抵抗力,即PoLy-6D在牙鲆体内有抗菌免疫效果。且PoLy-6D可以与革兰氏阳性菌和阴性菌都结合,可能作为病原识别受体发挥作用。这些结果不仅为其在渔用疫苗佐剂的应用提供理论基础,也为硬骨鱼补体系统的调控机制提供了新的见解,为牙鲆的健康高效养殖提供新思路。