PEG化FGFR3靶向免疫脂质体的制备及表征

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成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3)是FGFR家族的一员,在细胞的增殖分化中起到重要的调节作用,与许多肿瘤的发生存在着密切的关系,已成为肿瘤治疗的一个潜在靶点。本课题中,我们设计了一种靶向FGFR3且带有半胱氨酸残基的单链抗体(single chain fragment variable,Sc Fv),并使其与脂质体制备原料偶联,制备成为免疫脂质体,从而达到药物对肿瘤的靶向递送。我们通过PCR扩增目的基因,通过分子生物学手段构建p ET-20b-Sc Fv-Cys重组质粒,并在大肠杆菌内完成可溶性表达。经镍亲和层析柱纯化,得到纯度95%的目的蛋白,产量可达每升菌液10mg以上。然后在氮气保护的条件下完成Sc Fv-Cys与脂质体制备原料mal PEG2000-DSPE的偶联,获得Sc Fv-PEG2000-DSPE。采用旋转蒸发成膜和超声的方法制备脂质体和免疫脂质体,经滤膜过滤筛选后,利用激光粒度分析仪和电子显微镜检测,显示脂质体有较好的粒径和形态。最后,通过荧光脂质体转染实验,显示免疫脂质体对FGFR3高表达的膀胱癌细胞RT112有较明显的靶向效果,而阴性对照T24细胞没有明显的靶向效果,证明免疫脂质体的制备成功。综上所述,我们成功制备了一种PEG化的靶向FGFR3的免疫脂质体,并对其表征,证明了它的靶向效果。作为一个新型的药物靶向递送系统,其在肿瘤治疗和药物的开发方面具有良好的应用前景。
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