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目的：
巨大儿是指出生体重≥4000g的足月活产新生儿，其全球发生率逐渐上升。分娩巨大儿不仅会增加产后出血、新生儿窒息等不良妊娠结局的发生风险，出生时期的肥胖对新生儿健康状况的影响还会延续至儿童期甚至成年阶段，巨大儿在其成年后罹患代谢疾病比如肥胖、糖尿病等的风险更高。巨大儿的发生虽与妊娠期糖尿病（GDM）密切相关，但随着近年对GDM筛查的普及以及管理的规范化，GDM孕妇分娩巨大儿的发生率逐渐降低，糖代谢正常的非GDM巨大儿发生率却仍呈上升趋势，其具体作用机制尚不明确。如何预防分娩巨大儿带来的健康隐患，如何将预防儿童肥胖及成年期慢性疾病的关口前移成为当今公共卫生领域重要研究内容之一。因此，揭示非GDM巨大儿的发生机制，寻求有效的预防和干预策略，对提升全民健康具有重要意义。
本实验室前期代谢组学研究发现，脐血代谢水平在非GDM巨大儿组和对照组间存在差异，而且非GDM巨大儿胎盘组织中与脂肪酸转运相关的PPARA和PPARG、FAT/CD36、FABPpm的mRNA和蛋白的表达水平是增高的，那么非GDM巨大儿脐血中脂肪酸水平以及脂肪酸转运相关基因的蛋白浓度是否也发生了变化尚不清楚。实验室前期研究还发现在非GDM巨大儿胎盘中miR-27b的表达水平是降低的。有研究报道miR-27b能够靶向调控PPARA和PPARG的表达，那么在巨大儿胎盘组织中PPARA和PPARG的表达变化是否受到miR-27b的调控未见报道。为此，本研究从人群研究和细胞实验两个方面，探讨脐血脂肪酸水平及脂肪酸转运相关蛋白水平与非GDM巨大儿发生的关系以及胎盘滋养层细胞中miR-27b是否靶向调控PPARA、PPARG的表达,旨在为脂肪酸转运在非GDM巨大儿发生中的可能机制提供新的线索。
方法：
1.人群研究
（1）研究对象：采用病例-对照研究设计，连续收集2014年6月至2016年6月于某医科大学附属第二医院妇产科进行产检并分娩的产妇及新生儿为研究对象。病例组（巨大儿组）为出生体重≥4000g的新生儿和产妇，对照组（正常出生体重儿组）为随机选择的出生体重在2500～3999g，且与巨大儿出生时间相差3天以内的新生儿和产妇。孕妇入选标准为：①正常妊娠，②单胎、足月分娩，③糖耐量试验正常且新生儿无先天畸形；排除标准为：①产妇孕前有常见慢性疾病如糖尿病、高血压等；②有妊娠合并症者如糖尿病、高血压、心脏病等；③有妊娠并发症者如胎盘异常、先兆子痫等；④新生儿先天畸形者。
（2）研究方法：采用问卷调查和实验室检测相结合的方法。①通过问卷调查以及医院信息系统获得产妇以及新生儿的基本情况；②采用气相色谱-质谱联用的方法来测定脐血游离脂肪酸水平；③采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测脐血中与脂质转运和代谢相关基因（FABP4、PPARA、PPARG）的蛋白浓度；④采用Logistic回归分析影响巨大儿发生的相关因素。应用SPSS24.0软件进行数据分析。
2.细胞实验
（1）实验材料：人胎盘绒毛膜滋养层（HTR-8/SVneo）细胞,购于上海中乔新舟生物科技有限公司。
（2）实验方法：通过细胞转染实验验证miR-27b对待测靶基因（PPARA、PPARG）的调控作用，采用Quantify Real Time PCR（qRT-PCR）评估miR-27b的转染效果以及待测靶基因的mRNA水平。
结果：
1.脐血游离脂肪酸水平
1.1基线资料分析：本研究共收集到巨大儿和正常出生体重儿各20例。基线资料分析结果显示，除孕周和男性胎儿比例在两组间存在统计学差别外，其他因素如产妇年龄等在两组间并未显示有意义差别。
1.2脐血脂肪酸水平：测得两组脐血脂肪酸共16种，包括饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸，其中棕榈酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸等在巨大儿组有增高趋势，但差别未达到统计学意义。
2.脐血脂肪酸转运相关基因的蛋白水平
2.1基线资料分析：本研究共收集到巨大儿和正常出生体重儿各42例。基线资料分析结果显示，巨大儿组孕前体重、孕前BMI、孕期增重、孕周、剖宫产比例及男性胎儿所占比例均有意义地高于对照组（P＜0.05），而其他因素如产妇年龄等在两组间并未发现统计学差别。
2.2脐血中FABP4、PPARA、PPARG的蛋白水平：结果发现，FABP4、PPARA、PPARG的蛋白表达水平在巨大儿组脐血中有下降趋势，但差别未达到计学意义（P值分别为0.127，0.503，0.159）。进一步按分娩孕周分层后分析显示，在高孕周（孕周＞39）层中，巨大儿组FABP4基因的蛋白水平显著低于对照组（P=0.022），PPARA、PPARG基因的蛋白水平在两组间均没有统计学差异,而在低孕周（孕周≤39）层中，FABP4、PPARA、PPARG基因蛋白表达水平在两组间均没有统计学差异。按照孕期增重分层后分析显示，在孕期增重过多的层中，巨大儿组FABP4蛋白水平低于对照组（P=0.033），PPARA、PPARG的蛋白表达水平在两组间无统计学意义。而在孕期增重正常层中，三者均未显示两组间有统计学差异。按性别分层分析显示，在男性新生儿和女性新生儿中，FABP4、PPARA、PPARG基因蛋白水平在两组间均没有统计学差异。
2.3脐血中FABP4、PPARA、PPARG的蛋白水平与新生儿出生体重的相关分析：结果显示，FABP4、PPARA、PPARG的蛋白水平与新生儿体重在两组间均未显示有意义相关。
2.4巨大儿发生风险的影响因素分析：单因素Logistic回归分析发现，胎儿性别、孕周、孕期增重、FABP4的蛋白水平与巨大儿的发生均显示有意义的关联。进一步多因素分析在控制了相关混杂因素后，发现脐血低水平的FABP4蛋白浓度、男性胎儿比例的增高和长孕周会增大巨大儿发生风险（P值分别为0.046，＜0.001,0.003）；而孕期增重不足会降低巨大儿的发生风险（P＜0.001）。
3.细胞实验显示：在人胎盘滋养层细胞（HTR-8/SVneo cell）过表达miR-27b靶基因PPARA、PPARG的mRNA水平显示降低趋势；抑制miR-27b靶基因PPARA、PPARG的mRNA水平显示增高趋势，但未达到统计学差异。
结论：
1.非GDM巨大儿的脐血脂肪酸水平与对照组相比未显示统计学差异，需要增加样本量进一步研究。
2.经多因素Logistic回归分析发现，非GDM巨大儿脐血低水平的FABP4，可能会增加巨大儿发生风险。
3.miR-27b靶向验证实验表明，在人胎盘滋养层细胞（HTR-8/SVneo cell）中，miR-27b直接影响预测靶基因PPARA、PPARG的mRNA表达水平的证据还有待进一步完善。
巨大儿是指出生体重≥4000g的足月活产新生儿，其全球发生率逐渐上升。分娩巨大儿不仅会增加产后出血、新生儿窒息等不良妊娠结局的发生风险，出生时期的肥胖对新生儿健康状况的影响还会延续至儿童期甚至成年阶段，巨大儿在其成年后罹患代谢疾病比如肥胖、糖尿病等的风险更高。巨大儿的发生虽与妊娠期糖尿病（GDM）密切相关，但随着近年对GDM筛查的普及以及管理的规范化，GDM孕妇分娩巨大儿的发生率逐渐降低，糖代谢正常的非GDM巨大儿发生率却仍呈上升趋势，其具体作用机制尚不明确。如何预防分娩巨大儿带来的健康隐患，如何将预防儿童肥胖及成年期慢性疾病的关口前移成为当今公共卫生领域重要研究内容之一。因此，揭示非GDM巨大儿的发生机制，寻求有效的预防和干预策略，对提升全民健康具有重要意义。
本实验室前期代谢组学研究发现，脐血代谢水平在非GDM巨大儿组和对照组间存在差异，而且非GDM巨大儿胎盘组织中与脂肪酸转运相关的PPARA和PPARG、FAT/CD36、FABPpm的mRNA和蛋白的表达水平是增高的，那么非GDM巨大儿脐血中脂肪酸水平以及脂肪酸转运相关基因的蛋白浓度是否也发生了变化尚不清楚。实验室前期研究还发现在非GDM巨大儿胎盘中miR-27b的表达水平是降低的。有研究报道miR-27b能够靶向调控PPARA和PPARG的表达，那么在巨大儿胎盘组织中PPARA和PPARG的表达变化是否受到miR-27b的调控未见报道。为此，本研究从人群研究和细胞实验两个方面，探讨脐血脂肪酸水平及脂肪酸转运相关蛋白水平与非GDM巨大儿发生的关系以及胎盘滋养层细胞中miR-27b是否靶向调控PPARA、PPARG的表达,旨在为脂肪酸转运在非GDM巨大儿发生中的可能机制提供新的线索。
方法：
1.人群研究
（1）研究对象：采用病例-对照研究设计，连续收集2014年6月至2016年6月于某医科大学附属第二医院妇产科进行产检并分娩的产妇及新生儿为研究对象。病例组（巨大儿组）为出生体重≥4000g的新生儿和产妇，对照组（正常出生体重儿组）为随机选择的出生体重在2500～3999g，且与巨大儿出生时间相差3天以内的新生儿和产妇。孕妇入选标准为：①正常妊娠，②单胎、足月分娩，③糖耐量试验正常且新生儿无先天畸形；排除标准为：①产妇孕前有常见慢性疾病如糖尿病、高血压等；②有妊娠合并症者如糖尿病、高血压、心脏病等；③有妊娠并发症者如胎盘异常、先兆子痫等；④新生儿先天畸形者。
（2）研究方法：采用问卷调查和实验室检测相结合的方法。①通过问卷调查以及医院信息系统获得产妇以及新生儿的基本情况；②采用气相色谱-质谱联用的方法来测定脐血游离脂肪酸水平；③采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测脐血中与脂质转运和代谢相关基因（FABP4、PPARA、PPARG）的蛋白浓度；④采用Logistic回归分析影响巨大儿发生的相关因素。应用SPSS24.0软件进行数据分析。
2.细胞实验
（1）实验材料：人胎盘绒毛膜滋养层（HTR-8/SVneo）细胞,购于上海中乔新舟生物科技有限公司。
（2）实验方法：通过细胞转染实验验证miR-27b对待测靶基因（PPARA、PPARG）的调控作用，采用Quantify Real Time PCR（qRT-PCR）评估miR-27b的转染效果以及待测靶基因的mRNA水平。
结果：
1.脐血游离脂肪酸水平
1.1基线资料分析：本研究共收集到巨大儿和正常出生体重儿各20例。基线资料分析结果显示，除孕周和男性胎儿比例在两组间存在统计学差别外，其他因素如产妇年龄等在两组间并未显示有意义差别。
1.2脐血脂肪酸水平：测得两组脐血脂肪酸共16种，包括饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸，其中棕榈酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸等在巨大儿组有增高趋势，但差别未达到统计学意义。
2.脐血脂肪酸转运相关基因的蛋白水平
2.1基线资料分析：本研究共收集到巨大儿和正常出生体重儿各42例。基线资料分析结果显示，巨大儿组孕前体重、孕前BMI、孕期增重、孕周、剖宫产比例及男性胎儿所占比例均有意义地高于对照组（P＜0.05），而其他因素如产妇年龄等在两组间并未发现统计学差别。
2.2脐血中FABP4、PPARA、PPARG的蛋白水平：结果发现，FABP4、PPARA、PPARG的蛋白表达水平在巨大儿组脐血中有下降趋势，但差别未达到计学意义（P值分别为0.127，0.503，0.159）。进一步按分娩孕周分层后分析显示，在高孕周（孕周＞39）层中，巨大儿组FABP4基因的蛋白水平显著低于对照组（P=0.022），PPARA、PPARG基因的蛋白水平在两组间均没有统计学差异,而在低孕周（孕周≤39）层中，FABP4、PPARA、PPARG基因蛋白表达水平在两组间均没有统计学差异。按照孕期增重分层后分析显示，在孕期增重过多的层中，巨大儿组FABP4蛋白水平低于对照组（P=0.033），PPARA、PPARG的蛋白表达水平在两组间无统计学意义。而在孕期增重正常层中，三者均未显示两组间有统计学差异。按性别分层分析显示，在男性新生儿和女性新生儿中，FABP4、PPARA、PPARG基因蛋白水平在两组间均没有统计学差异。
2.3脐血中FABP4、PPARA、PPARG的蛋白水平与新生儿出生体重的相关分析：结果显示，FABP4、PPARA、PPARG的蛋白水平与新生儿体重在两组间均未显示有意义相关。
2.4巨大儿发生风险的影响因素分析：单因素Logistic回归分析发现，胎儿性别、孕周、孕期增重、FABP4的蛋白水平与巨大儿的发生均显示有意义的关联。进一步多因素分析在控制了相关混杂因素后，发现脐血低水平的FABP4蛋白浓度、男性胎儿比例的增高和长孕周会增大巨大儿发生风险（P值分别为0.046，＜0.001,0.003）；而孕期增重不足会降低巨大儿的发生风险（P＜0.001）。
3.细胞实验显示：在人胎盘滋养层细胞（HTR-8/SVneo cell）过表达miR-27b靶基因PPARA、PPARG的mRNA水平显示降低趋势；抑制miR-27b靶基因PPARA、PPARG的mRNA水平显示增高趋势，但未达到统计学差异。
结论：
1.非GDM巨大儿的脐血脂肪酸水平与对照组相比未显示统计学差异，需要增加样本量进一步研究。
2.经多因素Logistic回归分析发现，非GDM巨大儿脐血低水平的FABP4，可能会增加巨大儿发生风险。
3.miR-27b靶向验证实验表明，在人胎盘滋养层细胞（HTR-8/SVneo cell）中，miR-27b直接影响预测靶基因PPARA、PPARG的mRNA表达水平的证据还有待进一步完善。