论文部分内容阅读
目的:探讨70kDa热休克蛋白8(Heat shock 70kDa protein 8,HSPA8/Heat shock protein 70,HSC70)在正常与不同退变程度的腰椎间盘髓核组织中的表达情况,进而评估HSPA8在人腰椎间盘退变过程中的作用,并对椎间盘退变程度与HSPA8表达的关系进行分析。方法:2017年6月—2018年4月我院行腰椎间盘手术患者标本共收集72例,其中18例作为对照组(取自脊柱侧弯的青少年患者的髓核组织),54例为实验组(取自腰椎间盘退变患者的髓核组织)。根据Spengler方法及术前MRI将腰椎间盘退变分为:正常组、突出组、脱出组、游离组四种类型。纳入标准:(1)入院后经MRI检查明确诊断;(2)符合腰椎间盘突出症的诊断标准;(3)患者或其家属自愿签署知情同意书。排除标准:(1)哺乳期、妊娠期妇女;(2)合并感染患者;(3)合并肿瘤患者;(4)合并后纵韧带骨化、黄韧带骨化患者;(5)合并免疫性疾病或其他全身疾病的患者。本实验所涉及到的标本均经患者或其家属同意,并签署知情同意书,青岛大学附属医院伦理委员会审批通过。根据术前MRI将实验组分为3组:突出组18例、脱出组18例、游离组18例。术中取出的髓核组织立即用生理盐水洗干净,通过使用苏木素-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE)以观察退变椎间盘与正常椎间盘髓核细胞数量、形态学差异、细胞密度;通过免疫组织化学(Immunohistochemis-try,IHC)技术检测HSPA8在不同椎间盘退变程度中的表达量;Western-blot方法检测HSPA8在各个椎间盘退变等级中的表达量。为了使实验结果更具有说服力且更加可靠,更加真实地反应出髓核组织中HSPA8的变化情况以及表达含量,所有标本均按照要求标准取材,尽所有可能排除以及避免椎管内的其它组织对术中所取髓核组织的影响,以使所有的标本均来自于腰椎间盘中央部位的髓核组织,并对结果统计学分析。P<0.01表明存在显著差异,具有统计学意义。结果:苏木素-伊红染色结果:对照组与实验组的细胞形态、数目有明显改变,细胞密度存在显著差异(F=936.80,P<0.01)。免疫组织化学结果:HSPA8在腰椎间盘髓核组织中表达,且随着疾病程度的加重,HSPA8表达逐渐减少,存在显著差异(F=2110.43,P<0.01),具有统计学意义。Western-blot结果:人退变髓核组织中HSPA8表达量随着椎间盘退变程度的进展逐渐降低,存在显著差异(F=1841.72,P<0.01),具有统计学意义。结论:HSPA8在正常腰椎间盘髓核组织、退变腰椎间盘髓核组织中均表达,且正常的椎间盘髓核组织中HSPA8的表达明显高于退变椎间盘组织,HSPA8表达随着腰椎间盘退变程度的加重逐渐降低。HSPA8可能参与了人腰椎间盘退变的过程,可以作为腰椎间盘退变严重程度的生物学检测指标之一。但是,在腰椎间盘退变过程中,究竟是通过哪条信号通路调节HSPA8的表达,有待进一步研究。