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本研究从体外评价筛选自人体唾液和粪便的乳酸菌对幽门螺杆菌的抑制效果,分析抑菌物质特性,初步探讨抑制幽门螺杆菌的机制,以期得到对胃环境耐受能在胃中定植并在其中发挥益生作用的乳酸菌。主要研究内容及结果如下:(1)拮抗幽门螺杆菌的乳酸菌的筛选及其鉴定。从人体肠道源和口腔源样品中筛选出了对酸环境有一定耐受力、在涂布有幽门螺杆菌(ATCC26695)的CAB培养基上能产生明显抑菌圈的乳酸菌18株。将菌株按照相关规定编号,并保存至南昌大学食品科学与技术国家重点实验室益生菌菌种库中。(2)对具有抑制幽门螺杆菌能力的乳酸菌进行体外评价。乳酸菌各分离株的发酵液和无菌发酵上清液对幽门螺杆菌的抑制效果不存在显著性差异。在模拟人胃环境的实验中,筛选出了 12株对低pH值的人工胃液具有耐受性的乳酸菌;结合非特异性黏附指标及对GES-1细胞的特异性黏附实验,最终确定了唾液乳杆菌NCUH062005作为试验菌株。(3)抑制幽门螺杆菌的物质的初步研究。将NCUH062005的上清液按照不同的处理方式进行处理,用幽门螺杆菌作为指示菌测定其抑菌效果。对代谢产物中非酸性抑菌物质的热稳定性、广谱蛋白酶敏感性等多方面进行分析,发现NCUH062005除了产生乳酸可以抑菌外,还存在其他未知物质。这种未知物对过氧化氢酶、各类蛋白酶和热均不敏感,排除了未知物质为过氧化氢和大分子蛋白类的可能性。(4)乳酸菌对幽门螺杆菌干预机制的初步探索。NCUH062005能抑制幽门螺杆菌的脲酶活性,从而抑制其生长。NCUH062005能破坏幽门螺杆菌的外膜结构,使其代谢活性和毒性大大降低。先加或后加幽门螺杆菌及同时加入乳酸菌和幽门螺杆菌的各组,都能抑制幽门螺杆菌对GES-1细胞的黏附,其中预先加入NCUH062005的排阻组的效果最好,能产生约50%的抑制率。NCUH062005能降低GES-1细胞因幽门螺杆菌刺激而分泌的促炎因子(IL-8)的量。