四棱豆凝集素的分离纯化及抗蚜活性的研究

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四棱豆(Psophocarpus tetragonolobus)成熟种子经粉碎、磷酸盐缓冲溶液浸取、硫酸铵分段盐析、DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析得到对兔血红细胞有高效凝集活性的四棱豆凝集素(winged beanacidic agglutinin,WBAⅡ)。纯化的WBAⅡ经不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析显示一条带。测定不同pH、温度、紫外光照时间和不同浓度变性剂脲对WBAⅡ活性的影响,试验结果表明:WBAⅡ在pH3.0-10.0,保持凝血活力不变;60℃时凝集活性开始下降,至90℃时活性完全消失;紫外光照时间40min以上活性开始下降。当脲浓度达到4mol/L时,WBAⅡ活性完全消失。对WBAⅡ的杀虫活性、作用机理等研究,结果表明:WBAⅡ对蚜虫的蜜露分泌数、生长和生殖有一定的抑制作用,对蚜虫具有一定的忌避作用和较强的胃毒作用。以2%凝集素粗品处理蚜虫,1d、2d后的蜜露分泌抑制率为30.00%、57.62%;24h、48h、72h后蚜虫的取食定居百分比为16%、14%、6%;3d、4d后死亡率为54%、82%;2d、3d、4d、5d后产若蚜数为0.01、0.04、0.04、0.04头;2d、3d、4d、5d后体重增长抑制率分别为浓度为26.09%、28.04%、39.23%、52.62%。以0.25%凝集素层析纯样品处理蚜虫,1d、2d后的蜜露分泌抑制率为41.67%、61.67%;24h、48h、72h后蚜虫的取食定居百分比26%、20%、6%;3d、4d后其死亡率为38%、78%;2d、3d、4d、5d后产若蚜数为0.08、0.28、0.24、0.14头;2d、3d、4d、5d后体重增长抑制率为27.94%、44.46%、66.16%、71.14%。WBAⅡ层析纯样品影响蚜虫糖原含量和蛋白含量;在活体条件下,抑制蚜虫消化液蛋白酶、消化液淀粉酶的活性,且浓度越高,抑制作用越强。
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