维生素C二步发酵法,第一步由单菌发酵将D-山梨醇转化为L-山梨糖,第二步由产酸菌氧化葡萄糖酸杆菌与伴生菌腊状芽孢杆菌混合发酵将L-山梨糖转化为2-酮基-L-古龙酸(维生素C前体)。本文通过对来源不同的苏云金芽孢杆菌进行分离、纯化、虫体复壮处理、遗传稳定性考察,筛选出一株新的伴生菌与生产用小菌氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)组成新菌系B15-14,并对其生物学特性进行了研究。结果表明:新组合菌与生产用菌系25B相比,摇瓶发酵周期缩短4h,糖酸转化率提高5.5个百分点,经传代稳定性考察,性状稳定。维生素C新组合菌系B15-14的生长特性及发酵特性为:新混合菌系B15-14在种子培养基中一个明显的特点就是对数期长,同一时期大小菌之间的数量比例低于生产菌系;在发酵过程中新菌系B15-14中小菌生长速度明显快于CK,菌体总生物量增加也较快。为了更好的发挥新组合菌系B15-14的发酵潜能,我们对其单因素发酵条件进行了研究,结果表明:新组合菌系B15-14最适种龄为22~24h,最适接种量为10~15%,250ml摇瓶最适装液量为20ml,最适起始山梨糖浓度为8%,最适发酵温度为29℃~31℃,最适初始pH值为6.7~7.0。利用均匀设计对新菌系B15-14发酵培养基进行了优化,结果表明:在实验选定的条件范围内,最适发酵培养基成分配比为玉米浆3.02%、KH2PO4 0.25%、MgSO4 0.03%、尿素0.43%。以生产菌系25B为对照,新菌系在最优化条件下进行十批次摇瓶发酵实验,结果表明,新菌系较同期的25B转化率提高了3.32%,平均发酵周期缩短了2.2h,新菌系表现出了较高的应用前景。