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背景与目的辅助生殖技术(ART)是治疗人类不孕不育的一种常规方法,尽管ART在实施时各项技术已尽量模拟母体受孕内环境的各项条件,但由于ART本身的非生理性操作,可能影响配子和胚胎的发育,甚至增加子代成年期疾病易感性,许多研究也表明ART子代早期流产、围产期疾病及出生低体重的风险增加,但病因仍不清楚。目前对于ART子代安全性的研究多集中在表观遗传方面,认为ART各操作过程可能影响子代的与生长发育相关印记基因的表达,因此了解这些印记基因在ART妊娠期的变化,探索相关机制,可为改善其不良出生结局和后期发育风险做出贡献。PEG10是位于7q21上的父系表达基因,在胎儿及胎盘生长发育过程中起到重要作用,许多实验也证实PEG10表达异常,会引起胚胎早期死亡、流产,妊娠期疾病风险增加,同时发现其在多种癌症中激活。L3MBTL1是位于20q13.12上的父系表达基因,其可调节正常和恶性细胞的自我更新,许多实验表明其表达水平正常,对细胞的正常有丝分裂和减数分裂有重要作用,同时其在许多骨髓恶性肿瘤中易缺失。那么这两个印迹基因在ART子代表达如何,其调节机制又是什么,目前研究较少。因此,我们采用实时荧光定量PCR (QRT-PCR)和甲基化特异性PCR方法(MSP)检测ART子代减胎胚胎、胎盘和脐血中两个基因的表达及甲基化情况,从妊娠早期和晚期的角度分别探讨其表达异常的意义和表达调节机制,为改善其不良出生结局提供新的思路。材料和方法ART组和正常对照组均分为三种组织,即胚胎、胎盘和脐血。收集ART多胎妊娠行减胎术的减胎胚胎和自然妊娠行人工流产的胚胎组织各15例；ART和自然妊娠子代出生时脐血和胎盘各30例。比较两组临床资料；应用QRT-PCR方法检测各组织中目的基因mRNA表达水平并比较；应用MSP方法检测目的基因甲基化状态并比较,结果利用SPSS17.0软件进行分析,检验水准为a=0.05。结果1.ART组与正常对照组在母亲的年龄、孕周、新生儿性别和新生儿平均出生体重方面均无显著性差异(P＞0.05),但ART组新生儿平均出生体重低于对照组。2.ART组胚胎中PEG10, L3MBTL1mRNA相对表达量(RQ值)均下调(P＜0.05)；脐血和胎盘组织中PEG10RQ值均上调(P＜0.05),而L3MBTL1RQ值在胎盘组织中下调(P＜0.05),在脐血中无差别(P＞0.05)。3.ART组中,PEG10RQ值在三种组织间比较,胎盘和脐血均高于胚胎组织(P＜0.05),而胎盘和脐血之间无差异(P=0.296)；L3MBTL1RQ值在三种组织间比较无差异(P=0.088)。4.ART组胚胎中PEG10, L3MBTL1启动子区甲基化阳性率均高于正常对照组(P＜0.05)；脐血和胎盘中PEG10启动子区甲基化阳性率均低于正常对照组(P＜0.05)；而L3MBTL1启动子区甲基化阳性率在胎盘中高于正常对照组(P＜0.05),在脐血中两组间无差异(P＞0.05)。5.ART组中,PEG10启动子区甲基化阳性率在三种组织间比较,胎盘和脐血均低于胚胎(P<0.05),而胎盘和脐血之间无差异(P＞0.05),L3MBTL1启动子区甲基化阳性率在三种组织间比较无差异(P＞0.05)。6.ART组中,甲基化的胚胎、胎盘和脐血中PEG10、L3MBTL1RQ值均低于非甲基化的相应标本(P＜0.05)。在甲基化的胎盘和脐血中PEG10RQ值均高于胚胎组织(P＜0.05),而非甲基化的各类标本之间无差异(P＞0.05)；甲基化和非甲基化的各类标本中L3MBTL1RQ值比较均无差异(P>0.05)。结论1.ART后妊娠早期印记基因PEG10、L3MBTL1的转录表达均下调,妊娠晚期PEG10转录表达上调而L3MBTL1转录表达下调,印记基因表达异常可能是引起ART子代出生结局不良的原因。2.ART后妊娠早期印记基因PEG10、L3MBTL1启动子区甲基化阳性率均较高,妊娠晚期PEG10启动子区甲基化阳性率较低而L3MBTL1启动子区甲基化阳性率仍较高,启动子区的异常甲基化可能是表达变化的调节机制之一。