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毛囊是绵羊的特征性结构,几乎遍布全身皮肤,成熟毛囊的形成过程至少涉及到上皮及真皮来源的20余种不同的细胞群,这些细胞间复杂的相互作用以及细胞外基质的影响,都会改变毛囊细胞的功能特性以及细胞表面分子介导的信号传递。从分子水平来说,绵羊毛囊的发育是从合成特异性mRNA和蛋白质开始的,根本的原因是核内基因的启动,从分子水平阐明基因表现的调节机制是理解绵羊毛囊分化和发育的关键,基因的选择表达,决定着毛囊的发育,寻找与绵羊毛囊发育相关的基因,以探讨毛囊发育的分子机制,最终可以分析控制绵羊羊毛品质的生物学过程。 本文首先以新疆细毛羊和阿勒泰羊作为实验研究对象,应用消化法分离毛囊细胞,体外培养并观察细胞,采用0.25%与0.125%的胰酶分离绵羊毛囊细胞,获得2种不同形态的毛囊细胞;对比分析了热消化法与冷消化法对分离毛囊细胞的影响。结果表明,热消化法优于冷消化法;同时,观察到新疆细毛羊与阿勒泰羊的毛囊细胞形态基本一致。 其次,以中国美利奴细毛羊作为实验材料,应用mRNA差异显示技术(DD-PCR)筛选绵羊毛囊发育的相关基因,实验过程中,分别给予绵羊皮内注射10ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)、20ng/ml表皮细胞生长因子(EGF)、将羊毛拔干净以后不注射生长因子、不做处理的对照组,共3个实验组和1个对照组,选用3种锚定引物,8种随机引物,进行差异显示反转录PCR,扩增产物经电泳分析、鉴定并回收差异表达的基因片段,进行二次扩增,利用pMD18-T载体将扩增后的片段克隆,经过Northern杂交分析,测序,Blast软件检索。 结果,虽然没有发现与胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)、表皮生长因子(EGF)及其受体相关的EST表达,但是SQ70(2)和牛皮肤cDNA文库中的EST序列匹配,同源分数比较高,期望值2e-58,Id值为95%,提示SQ70(2)为已知基因,是与绵羊皮肤发育有关的一段EST片段(GenBank登陆号CX863390)。SQ75(7)同源分数比较低,Id值小于90%,推断SQ75(7)为新基因,是绵羊皮肤中或者是毛囊中存在高表达的一段EST片段(GenBank登陆号CX863391),至于这些EST的全序列和具体的生物学功能还有待于进一步研究。