论文部分内容阅读
冠心病是冠状动脉粥样硬化性心脏病的简称,是指冠状动脉发生严重粥样硬化或痉挛,使冠状动脉狭窄或阻塞,以及血栓形成造成管腔闭塞,导致心肌缺血缺氧或梗死的一种心脏病,而炎症和血栓形成是其基本的病理基础,贯穿于冠心病发生发展的整个过程。近年来研究发现,血小板不仅参与了动脉粥样硬化后期血栓形成,而且在动脉粥样硬化形成初期发挥重要的作用,血小板通过其在炎症和免疫反应中的作用参与动脉粥样硬化发生发展的整个过程。血小板作为炎症细胞自身活化后释放一定量的趋化因子,参与炎症反应,血小板还是活化炎症细胞的重要因素,促进炎症介质与趋化因子的分泌释放。炎性趋化因子通过介导白细胞的募集,使大量白细胞浸润于炎症损伤部位,在炎症反应中发挥重要的作用。内皮细胞和平滑肌细胞活化后释放的趋化因子,通过与血小板膜受体结合,使血小板发生黏附、聚集和释放,血小板活化和血栓形成。血小板和趋化因子的这种相互作用,在动脉粥样硬化血栓形成的过程中发挥了重要的作用。本课题组前期筛选了107个冠心病相关差异基因,其功能涉及炎症免疫、细胞周期、信号传导、细胞凋亡、细胞黏附、细胞活动、细胞结构、发育、应激反应等多个方面,通过GO和pathway分析发现炎症免疫相关基因占绝大多数,因此,课题组首先对炎症免疫相关基因进行了临床血清学验证,白介素-8即是其中之一。鉴于冠心病、血小板、炎症反应、血栓形成之间的密切联系,提出了“IL-8通过介导血小板活化而参与冠心病发病过程”的假说,本课题采用比浊法和流式细胞术检测IL-8对血小板聚集率和血小板活性的影响,并采用急性心肌梗死模型,探讨IL-8在急性心肌梗死的血小板活化中的作用,同时观察活血化瘀制剂芎芍胶囊对急性心肌梗死中IL-8的效应研究及作用特点,以期为该药的临床应用提供实验依据。本课题研究分为两部分：文献综述和实验研究。1文献综述：本部分从目前冠心病抗血小板药物治疗存在的问题以及血小板与趋化因子之间的相互关系及作用的研究进展进行综述。2实验研究：包括两部分实验研究一炎症趋化因子IL-8对血小板活化影响的研究目的：采用比浊法和流式细胞术,检测IL-8在血小板聚集率和血小板活性方面对血小板活化的影响。方法：以30例健康志愿者为研究对象,采取静脉全血10ml,制备富血小板血浆(Platelet Rich Plasma, PRP),将PRP分装到16个1.5ml离心管中。①血小板聚集率检测：室温下,1-3号PRP分别加入低、中、高三个不同浓度IL-8(IL-8L组、IL-8M组和IL-8H组)；4号管加入纯水为正常对照组(NC组)；5、6号分别加入ADP、AA(ADP、AA组)；7号同时加入中浓度IL-8、ADP (ADP+IL-8M组)；8号同时加入中浓度IL-8、AA (AA+IL-8M组)。37℃温浴5min后,检测PAG。②血小板活性检测：9-16号进行血小板活性检测,加入诱导剂量和方法同上,流式细胞术测其血小板CD62p表达。结果：IL-8L组、IL-8M组和IL-8H组的PAG和CD62p显著高于NC组,依次升高呈浓度依赖性,且与ADP和AA均具有协同作用。但IL-8各组的PAG和CD62p明显低于ADP组(P<0.01)。实验研究二IL-8在AMI血小板活化中的作用及川芎赤芍有效部位干预研究目的：研究急性心肌梗死模型中IL-8与血小板活化的相关性,观察芎芍胶囊对大鼠急性心肌梗死模型IL-8及血小板活化的影响。方法：48只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、IL-8受体拮抗剂组、XSC低剂量组、XSC高剂量组和阿司匹林组,每组8只,XSC低剂量组和XSC高剂量组分别给予芎芍胶囊13g/kg·d和52g/kg·d,阿司匹林组给予阿司匹林9g/Kg·d,空白对照组和模型组给予等量生理盐水。IL-8受体拮抗剂组给予IL-8受体拮抗剂(Reparixin) 30mg/kg·d,尾静脉注射一周后和其余各组灌胃5周后,行冠脉结扎术,建立大鼠急性心肌梗死模型,3小时后腹主动脉取血,进行血小板聚集率、血浆IL-8和CD62p检测。结果：①模型组CD62p、PAG和血浆IL-8的水平明显高于空白对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。②IL-8受体拮抗剂组的血浆IL-8水平与模型组无明显差异(P>0.05),CD62p和PAG的水平较模型组显著降低(P<0.01,P<0.01),且血浆IL-8与CD62p之间呈负相关(r=-0.725,P<0.05)。③与模型组相比,XSC低、高剂量组和阿司匹林组的血浆IL-8水平较模型组均有所下降(P<0.05,P<0.01,P<0.05),CD62p和PAG的水平也较模型组有所下降,且XSC低、高剂量组的血浆IL-8与CD62p之间相关(r=-0.778,P<0.05；r=-0.821,P<0.05)。结论：IL-8通过激活血小板参与了AMI后的血小板活化,且与ADP和AA有协同作用,但单独激活作用较弱,芎芍胶囊和阿司匹林均具有一定的抑制IL-8介导的血小板活化作用。