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长链非编码RNA (long non-coding RNA, lncRNA)是一类转录本长度超过200nt,在200nt-100kb之间的一类非编码RNA分子,位于细胞核内或胞浆内,在真核细胞内被普遍转录,但不具有或很少具有蛋白编码功能。目前对lncRNA的研究,特别是在禽类中还比较少。本实验利用RACE技术以及RT-PCR技术对在鸡上发现的一个未知功能的EST (Genebank Accn:CR406381.1)进行了了5’RACE和3’RACE扩增,并对得到的未知新基因序列进行生物信息学分析,利用RT-PCR以及荧光定量技术研究该新基因组织表达情况。本实验主要从以下三个部分进行试验研究。试验一为了得到该未知基因的全长cDNA序列,试验采用SMART RACE KIT (Clontech Laboratories Inc., USA)试剂盒对该基因进行全长克隆。实验结果如下：5’RACE扩增产物长度为1197bp,3’RACE扩增出现了4种不同的剪接体形式,分别为403bp、535bp、658bp、1310bp。将5’RACE及3’RACE序列结果进行校正后拼接,总共得到该新基因的4种不同的剪接体形式,长度分别为1782bp、1909bp、2032bp、2684bp。将该基因命名为pouAC22.其相应的四种剪接体形式分别命名为pouAC22-1(1782bp), pouAC22-2(1909bp), pouAC22-3(2032bp), pouAC22-4(2684bp)。利用生物信息学分析后发现该基因位于鸡22号染色体上,是禽类所特有的mRNA样长链非编码RNA,在哺乳动物上无同源基因。进行禽类间同源性比较后,发现该基因与火鸡、斑胸草雀、鸭的同源性比例分别为80%、70%、43%,小于其临近编码蛋白基因在这些物种间的同源性。但该基因在禽类3’端具有很高的保守性。试验二本部分主要利用RT-PCR及荧光定量PCR技术来检测该基因在鸡不同组织以及不同生长阶段的表达差异。该基因的四种不同的剪接体形式中pouAC22-4(2729bp)和pouAC22-1(1827bp)是其主要的表达形式。组织表达分析发现总pouAC22基因表达存在较大的组织差异性,其中在脑中表达量最高,胸肌中表达量最低。同一组织不同生长阶段也存在较大的表达差异,其中总pouAC22基因在胸肌中是17胚龄表达最高,在腿肌组织是7日龄表达量最高,在大脑组织是在7日龄表达量较高,在小脑组织是于17胚龄、7日龄表达量比较高。pouAC22-4是其最主要的表达形式,且其组织表达谱显示也是在脑组织中表达较高,在胸肌中表达较低,与该基因不同组织表达谱分析结果一致。pouAC22-4不同生长阶段表达分析显不pouAC22在胸肌组织中于12胚龄表达量最高,在大脑组织中于7日龄表达量较高,在肝脏组织中在17胚龄表达量较高。不同油脂添加水平对Total pouAC22的表达没有影响,但对剪接体形式pouAC22-4来说,不同油脂添加水平中,5%玉米油组和5%猪油组显著高于5%亚麻油组,其他组间差异不显著。试验三以丝毛乌骨鸡、洛克鸡、藏鸡、贵妃鸡、洛岛红、固始鸡-安卡鸡F2代资源群血样DNA为研究对象,通过克隆测序与直接测序相结合的方法在该基因上发现了共计5个变异位点,分别为C1800T、C1918T、A202G、A2198G、A2217G。其中A20206位点在固始鸡-安卡鸡中也被发现,把该基因位点与资源群体性状进行关联分析。结果显示：该突变与鸡4周体重、6周体重、腿肌重等指标达到差异显著水平(P<0.05),其中与6周体重达到差异极显著水平(P<0.01),显示pouAC22基因在鸡生长性状上的潜在效应。