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目的.:建立过氧化氢诱导的PC12细胞损伤模型,观察胰岛素对过氧化氢损伤的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:(1)PC12细胞过氧化氢损伤模型:建立PC12细胞常规培养后,加入不同浓度的过氧化氢对PC12细胞进行损伤,24h后通过MTT法测定细胞存活率,以确定最适损伤浓度。(2)抑制损伤实验:确定损伤浓度后,用不同浓度胰岛素对PC12细胞进行预处理30min,再用过氧化氢处理24小时,MTT法测定细胞存活率以及用Hoechst 33342确定凋亡的比率,明确胰岛素对过氧化氢诱导的细胞损伤是否具有抑制作用,同时确定药物的最佳浓度。(3)测定细胞内活性氧水平,测定线粒体膜电位及观察其超微结构。(4)通过细胞免疫组化及蛋白印迹实验分析细胞中Nrf2的相对含量变化,同时检测细胞内丙二醛(MDA)的含量,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)和过氧化物酶(CAT)活性。结果.:(1)通过实验发现PC12细胞对过氧化氢损伤具有一定的浓度依赖性,选定过氧化氢浓度600 μmol/L建立损伤模型。(2)600mol/L过氧化氢能明显地诱导PC12细胞凋亡,增加细胞凋亡率,并能使PC12细胞的线粒体跨膜电位下降,提高细胞内ROS水平。通过电镜也证实线粒体结构明显损伤。同时相应的抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT的活性下降,MDA的升高表明细胞脂质过氧化。100nmol/L胰岛素能明显地抑制过氧化氢导致的细胞凋亡作用,降低PC12细胞的凋亡率,并能显著地抑制过氧化氢引起的线粒体跨膜电位降低并降低胞内ROS水平,促进Nrf2的核转位,抑制SOD、GSH-Px、CAT活性的下降,抑制脂质过氧化,保护线粒体结构完整。结论:胰岛素对PC12细胞的过氧化氢损伤具有抑制作用,其可以提高细胞存活率,降低凋亡率。胰岛素通过上调抗氧化酶的活性,抑制线粒体损伤,发挥拮抗过氧化氢诱导PC12细胞凋亡的作用,并且其作用机制可能与Nrf2信号通路激活后保护细胞线粒体有关。随着对胰岛素基础研究的深入,胰岛素将会开辟治疗神经系统变行性疾病的新方式。