家蝇幼虫凝集素对肝癌的抗肿瘤活性研究

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凝集素是一类非免疫原的糖蛋白,具有凝集细胞,沉淀多糖的能力。凝集素,广泛地存在于许多物种及高等生物的各个组织中,一部分的凝集素具有一定的抗肿瘤活性。以半乳糖为配基的Sepharose4B经过活化,进行亲和层析,从家蝇幼虫体内得到一种凝集素。其分子量为59kDa,并且具有明显的凝血活性。通过细胞试验证明,家蝇幼虫凝集素可以明显抑制人类肝癌细胞BEL-7402的生长,抑制率最高可达到80%,呈明显的时间和浓度依赖性,并且在同样浓度下对于正常肝细胞L-02没有表现出抑制作用。HE染色和Hoechst33258荧光染色都能观察到典型的凋亡形态,即染色质浓缩和DNA裂解成片段。这表明,凝集素抑制细胞的增殖可能和诱导细胞发生凋亡有关。流式细胞仪分析表明,通过凝集素作用可以造成BEL-7402细胞的周期阻滞于在G1期,其凋亡率随时间延长而增加。凝集素能够诱导线粒体产生活性氧(ROS)并积累,造成线粒体膜电位缺失,并且细胞内一氧化氮显著升高。经过Western blotting法测定凋亡相关蛋白表达,发现凝集素诱导细胞中的P53周期蛋白表达量升高,使Bax与Bcl-2蛋白的表达比例升高,并且凝集素导还诱导了细胞色素C从线粒体中释放,进而引起了cleaved-caspase-3和cleaved-caspase-9表达量的升高,这说明家蝇幼虫凝集素抑制肝癌细胞BEL-7402的生长,是通过线粒体途径而诱发细胞的凋亡荷瘤小鼠实验说明,相对于空白对照和阳性对照组,凝集素能诱导H22细胞凋亡从而发挥其抗肿瘤作用,治疗过程后荷瘤小鼠的免疫功能不受损伤,IFN-γ和IL-2因子表达水平提高。流式细胞仪显示腹水肿瘤细胞的周期循环被阻滞于G2/M期,RT-PCR法进一步显示其凋亡可能是由于TNF-α升高和NF-κB的下降引起的。
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