水稻(Oryza sativa L.)是世界上最重要的粮食作物之一。世界上种植的相当一部分水稻，由于干旱和土壤盐渍化的影响而使其产量难以提高。通过基因工程技术培育抗旱耐盐新品种是提高水稻生产水平的最经济有效的措施之一。 LEA蛋白(Late-embryogenesis-abundant protein)为晚期胚胎富集蛋白，可在种子成熟过程中表达，也可受干旱、低温胁迫和脱落酸的诱导，在植物营养组织中高度表达，提高植物的抗旱耐盐性。 本实验在获得了大豆Em(LEA1)基因的基础上，利用水稻“丰达1号”建立了成熟胚再生体系，并进行了水稻的转化实验。水稻“丰达1号”是农艺性状较好的水稻品种，在我国生产上广泛应用。建立了水稻“丰达1号”的成熟胚再生体系。确定了较好的诱导培养基(Y1)，继代培养基(J4)，分化培养基(F3)，生根培养基(R)。构建了以大豆Em基因(LEA1)为目的基因的表达载体。应用农杆菌介导法转化水稻愈伤组织。转化后经潮霉素培养基筛选两次，获得了再生植株26株。选取其中4株生长良好的候选转基因水稻幼苗，通过抗潮霉素基因特异引物和大豆Em基因特异引物进行PCR扩增反应。可同时扩增出约800bp和350bp的特异片段，它们分别与抗潮霉素基因和Em基因大小一致。初步证明大豆Em基因己经整合到水稻基因组DNA中。对这4株转基因水稻进行RT-PCR检测，均可得到一明显的特异条带，证实了转入的外源大豆Em基因在水稻中能够表达。 本实验在获得了几个大豆 LEA 基因的基础上，对它们的上游调控序列进行了扩增，并进行了启动子活性的初步鉴定。根据NCBI基因数据库公布的大豆LEA基因或ORF序列，设计反向引物。利用染色体步行法扩增了Em(LEA1)、PM30(LEA3)、ZLDE-2(LEA2)、GmPM12(LEA2)、PM29(LEA4)基因的翻译起始密码子上游约500-800bp的特异DNA片段。经分析，这些DNA序列富含AT并且含有启动子的基本元件TATA-box。用植物启动子分析软件PLACE对上述5个多核苷酸片段进行分析。结果表明，这些多核苷酸片段含有ABRE基序、MYC基序、MYB基序、DRE基序、GT1基序等顺式作用元件。由此推测这些多核苷酸片段可能具有启动子活性，并且可能受到干旱、高盐等胁迫因素的诱导。将组成型启动子CaMV35S与GFP报告基因融合，构建表达载体作为阳性对照。将其中三个基因(Em、PM30、ZLDE-2基因)的上游多核苷酸片段与GFP报告基因融合，构建表达载体用于启动子活性分析。利用根瘤农杆菌转化洋葱内表皮细胞。经荧光显微镜检测，结果表明Em、PM30、ZLDE-2基因的上游多核苷酸片段和组成型启动子CaMV35S一样可驱动GFP基因在细胞质中的表达，证实了它们确实为Em、PM30、ZLDE-2基因的启动子。这一研究结果为更好的研究LEA基因的表达调控打下基础。