大豆异黄酮提取及其组分分离工艺研究

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大豆异黄酮是从大豆的成熟种子或其加工副产品中提取的一组异黄酮类化合物,是大豆生长过程中形成的一类次生代谢产物,有很强的生物活性,具有抑制癌细胞生长,诱发癌细胞凋亡,降低心血管疾病,预防和治疗骨质疏松、动脉粥样硬化以及改善和治疗妇女更年期综合症等多种生理保健功能。大豆异黄酮因其独特的药用价值和生物学活性为大豆的开发应用展示了广阔的前景。本文对大豆异黄酮的提取、纯化和分离工艺进行了研究,目的在于寻求一条成本或耗能较低、收益较高、工艺较为简单的工艺路线,为大豆异黄酮的工业化生产提供参考。   通过单因素实验和正交试验,确定了大豆异黄酮的乙醇提取工艺参数:大豆粉过60目筛,在80℃的条件下,用70%(体积分数)的乙醇水溶液,以1:22(w/v)的料液比,提取2次,每次时间均为2.5 h。   采用乙醇提取脱脂大豆粉中的异黄酮,并对大豆异黄酮粗提品进行了石油醚法脱脂、等电点法脱蛋白的初步处理,结合大孔树脂吸附、乙酸乙酯萃取进行了精制,对于利用大孔树脂吸附的静态吸附与动态吸附的可能影响因素分别进行了研究。通过对3种大孔吸附树脂静态吸附特性的研究,确定了HPD-600树脂是一种理想的大豆异黄酮的吸附剂,该树脂对大豆异黄酮不仅吸附量大,而且解吸率高,适合大豆异黄酮的分离富集。通过对HPD-600树脂的动态吸附特性研究,确定了大豆异黄酮提取液合适的上样液浓度为0.15 mg/mL、pH值为4.5~5.5、上样量为4.5 BV、吸附流速为1.5 mL/min,用3.0 BV80%乙醇以1.5 mL/min解吸。大孔树脂处理后的大豆异黄酮再经乙酸乙酯萃取,甲醇重结晶,可得90%的产品。   通过硅胶柱、聚酰胺柱和Sephadex LH-20柱色谱的反复分离纯化,从大豆的乙醇提取物中分离出4种异黄酮单体。通过HPLC、UV、1H-NMR、13C-NMR等技术,对分离得到的4种异黄酮单体A、B、C、D进行了结构鉴定,它们分别为:大豆黄素(daidzein)、大豆苷元糖苷(daidzin)、染料木素(genistein)、染料木素糖苷(genistin)。
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