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黏膜相关组织淋巴瘤异位蛋白1(mucosa-associated-lymphoid-tissuelymphoma-translocation1,MALT1)是NF-κB信号通路上游一个重要的蛋白分子,同B细胞慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤蛋白(B-cell chronic lymphocyticleukemia/lymphoma10,BCL10)和含caspase募集结构的膜相关鸟苷酸激1(caspase-recruitment domain(CARD) containing membrane-associated guanylatekinase protein1,CARMA1)组成复合物CBM,将近端抗原受体蛋白信号传递给IκB激酶(IKK),进而激活NF-κB信号通路。MALT1-NF-κB信号通路的过度活化与炎症及肿瘤的发生密切相关。 溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种发病机制尚不清楚的非特异性慢性肠道炎症性疾病,以结肠黏膜的炎症为主要特征,该病始发于直肠以连续的方式向近侧延伸至部分或全结肠。溃疡性结肠炎在影响着患者生活质量的同时也导致结肠癌的发生率升高,给人们的生命健康带来很大的威胁。目前抗炎和调节免疫反应是治疗溃疡性结肠炎的主要方法,一些免疫抑制药物被用来治疗肠炎,比如水杨酸类药物、强的松、他克莫司、环孢素A及TNF抑制剂等。但是上述治疗方法都不可避免的带有一定的毒副作用包括肾功能损伤、固醇类依赖性以及严重的感染。因此,高效、低毒的肠炎治疗药物的发现十分重要。 在第一章中,首先对结肠炎的研究现状进行了分析,结肠炎发病机制尚未明确,其与基因、环境等多种因素相关,并且会增加结肠癌的发病风险。其次,对NF-κB信号通路,MALT1以及化合物MI-2、Mepazine之间的相互关联进行了阐述。进而,对NLRP3炎性小体进行了介绍,其作为固有免疫系统的重要组分,在机体免疫反应和炎性疾病发生过程中发挥重要作用,可以作为药物开发的重要靶点。最后,对结肠炎的治疗现状进行了总结。 在第二章中,通过DSS诱导的小鼠结肠炎模型,探讨了新合成的MALT1抑制剂MI-2及Mepazine是否对小鼠结肠炎具有改善作用。结果表明MALT1抑制剂MI-2及Mepazine能够明显改善DSS导致的小鼠腹泻、血便及组织病理指标的增高,并且有一定的剂量依赖性。首先,小鼠结肠长度数据及组织HE染色显示给药组的小鼠结肠损伤程度明显低于DSS组,同时CD11b免疫荧光组化结果表明巨噬细胞浸润情况较DSS组也有所改善。其次,p-p65免疫组化和组织蛋白免疫印迹实验结果显示,给药组小鼠的NF-κB信号通路明显被抑制。最后,ELISA检测结肠组织蛋白的结果显示给药组小鼠IL-1β和IL-6等炎症因子的表达量显著降低。 在第三章中,对化合物MI-2和Mepazine的作用机理进行了探讨。实验发现化合物MI-2和Mepazine对巨噬细胞中NLRP3炎症小体活化具有抑制作用,且MI-2抑制效果十分显著,明显优于Mepazine。采用LPS+ATP炎症小体活化模型考察了MI-2对IL-1β分泌的影响,发现MI-2可显著降低IL-1β在细胞上清中的含量。MI-2对第一信号即LPS引起的NF-κB的活化有明显的抑制作用,western blot实验结果显示MI-2给药组p-p65、p-IKK以及p-IκB的表达量呈剂量依赖性降低。通过免疫沉淀及免疫荧光实验,考察了MI-2对第二信号即caspase-1活化的影响。MI-2给药处理可明显降低caspase-1的活化,进一步的结果,MI-2给药处理可明显抑制ASC和caspase-1的结合,NLRP3炎症小体复合物形成受阻,进而抑制了caspase-1的活化。 综上所述,研究发现新型MALT1抑制剂MI-2能够对DSS诱导的小鼠结肠炎起到一定的改善作用,阐明了MI-2通过抑制NF-κB信号通路激活并抑制NLRP3介导的caspase-1的活化从而抑制IL-1β、IL-6等炎性因子的释放并最终抑制炎症反应。这为临床治疗结肠炎提供了新的策略。同时MALT1抑制剂MI-2可以抑制NLRP3炎症小体介导的caspase-1的活化也提示位于NF-κB信号通路上的MALT1可能对NLRP3-ASC-caspase-1复合物具有调节作用,亦或MI-2有新的作用靶点。这些都有待进一步研究。