【摘 要】
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人血纤维蛋白原在凝血酶、Ca作用下,转变成为血纤维蛋白凝块.以此血纤维蛋白凝块作为选择剂,模拟体内血栓抗原,由小鼠来源的抗体噬菌体展示库中经亲和选择（淘汰）,富集得到血纤
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人血纤维蛋白原在凝血酶、Ca<2+>作用下,转变成为血纤维蛋白凝块.以此血纤维蛋白凝块作为选择剂,模拟体内血栓抗原,由小鼠来源的抗体噬菌体展示库中经亲和选择（淘汰）,富集得到血纤维蛋白特异的噬菌体抗体.为了模拟体内抗体亲和性成熟过程,采用DNA改组（shuffling）技术,使抗体库基因重新组合,即用DNaseⅠ降解抗体基因DNA,回收20-50bp的片段,利用PCR技术将这些片段组装为同源抗体基因.改造鼠源抗体使之人源化,需先测定抗体基因序列,并将抗体序列输入数据库进行同源性查寻.PCR扩增得到的uPA功能域编码基因片段与人源化抗体基因连接并插入高效表达载体pET-21a,获得uPA融合基因的表达质粒.重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导融合蛋白表达.提取表达菌的周质蛋白,经苯甲脒-Sepharose 6B柱亲和层析,得到纯化的单链F<,V>/uPA功能域融合蛋白.融合蛋白在血纤维蛋白平板上表现出纤溶活性.S<,2444>显色底物法测定融合uPA的活性,约为6.0×10<4>IU/mg.按照每摩尔活力单位数比较,融合蛋白的uPA活力相当于天然uPA的80﹪.融合蛋白具有与血纤维蛋白的亲和力.
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