采用基于H-NMR的代谢组学方法对口腔鳞癌患者血浆的初步分析

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口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma OSCC)是头颈部常见的恶性肿瘤,占口腔癌的80[%]以上,其患病率和死亡率占恶性肿瘤的第六位,近年来其发病率有增加和发病年轻化的趋势。目前治疗的效果尚不能令人满意,原因是现在癌症的治疗都是一种“癌后治疗”,即在癌症已形成之后才进行各种治疗。如能在癌症形成之前就发现细胞形态的某些前驱性变化或癌症的生化标志物,对其进行治疗将癌变过程阻遏在癌前阶段,定将获得良好的疗效。 随着后基因时代的到来,生物技术的快速发展,对原癌基因(myc癌基因、ras癌基因家族)、抗癌基因(p16、p53、Rb)的鉴定和描述已通过分子生物学方法完成,蛋白质组(proteome)研究也建立了如肺癌、乳腺癌等实体肿瘤表达的蛋白质数据库,确立了相应的蛋白质标记物。而肿瘤的发生、发展与转移是在环境和遗传因素共同作用下,由多基因参与,经过多步骤、多阶段复杂的生物学演变过程而形成的疾病。其调控机制十分复杂。基因组学和蛋白质组学都忽略了整体器官中动态的代谢状态,不能提供可以了解生物体中整体细胞功能的信息。所以,就需要寻求一种新的方法来获得肿瘤在生物体内的整体生物信息,代谢组学方法为此提供了良好的技术平台。 基于高分辨率核磁共振(nudear malefic resonance NMR)技术的代谢组学在生物体液研究方面得到广泛应用,利用NMR对完整器官或组织细胞内许多微量代谢组分进行检测,可得到相应的生物体代谢物信息,研究这些组分的NMR图谱,综合分析这些信息所反映的生物学意义,可以了解生物体代谢的规律,找寻肿瘤发生、发展机制和特征性代谢物。 本研究的目的是通过采用<1>H-NMR的代谢组学方法对口腔鳞癌患者及正常人血液代谢物进行分析比较,找寻两者的差异点,用以探讨采用该方法研究口腔鳞癌的特征性代谢物方面的可能性。 完整的<1>H-NMR代谢组学分析的流程包括样品的采集和预处理、数据的采集和数据的分析及解释。整个分析过程应能尽可能地保留和反映总的代谢产物的信息。因此,本研究包括了以下内容: 1.人血浆的<1>H核磁共振图谱数据的获取 本实验严格制定样本的纳入及排除标准,尽量排除外在的干扰因素。对样本进行了高速低温离心处理、冻干处理、预饱和处理、核磁仪的ZGPR脉冲序列在水峰处进行重复测试的方法将水峰进行压制等一系列措施,从而获得了血浆样本的核磁图谱。 2.血浆样本的核磁图谱数据化处理及分析 血浆样本经核磁共振检测后,产生了大量而多维的原始数据,通过合理应用一系列的化学计量学和多元统计分析方法,达到简化数据,寻找特征性化合物的目的。本实验采用非监督性模式分析的主成分分析法(Pfindpfl Component Analysis,PCA)进行分析,通过主成分的得分图及载荷图,我们可以较清晰地区分口腔鳞癌患者的血浆和正常对照,结合文献,对表现为最大贡献率地化学位移点进行分析及预测。 3.实验结果 通过分析获得了贡献率最大的化学位移值是δ3.5199ppm,其次为δ 3.0785ppm、δ3.2807ppm,这些结果说明以上几个化学位移值是区分OSCC患者血浆的代谢图谱和正常对照的关键点。这几个化学位移值在核磁波谱中均位于糖基化合物的信号区内,可能是与肿瘤患者体内的糖酵解增加、肿瘤细胞的分裂、增殖以及蛋白的过糖基化有关。 综上所述:基于<1>H-NMR的代谢组学可以较好的将口腔鳞癌患者的血浆和正常对照进行区别,未来可以利用该方法筛选出具有特征性的化合物,并可作为寻找口腔鳞癌的特征性标志物的有效方法。
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