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酮洛芬(Ketoprofen,KPF)属苯丙酸类非甾体抗炎药(NSAIDs),具有良好的解热、镇痛及抗炎作用。与其他NASIIDs相比,KPF对炎性疼痛及术后疼痛镇痛明显,且副作用轻。医学临床,酮洛芬相关制剂已广泛用于治疗炎症(关节炎、腱鞘滑膜炎、强直性脊椎炎等)、外伤及术后疼痛。在宠物相关疾病防治方面,国内尚未见报道。本课题评价酮洛芬注射用原位凝胶镇痛效应及在犬体内药代动力学,冀望为宠物术后镇痛提供长效新制剂。具体研究如下:1.10%KPF注射用原位凝胶镇痛的药效学作用研究1.1豚鼠皮内丘疹试验 选用清洁级豚鼠48只,雌、雄各半,随机分为6组。除空白组之外,其他组分别皮内注射生理盐水、100 mg/kg的安乃近注射液、8 mg/kg的利多卡因注射液、25mg/kg和50mg/kg的KPF注射用原位凝胶。以针刺皮丘部的无痛反应率为评价指标,观察镇痛效果。结果显示,与生理盐水对照组相比,KPF注射用原位凝胶低、中剂量组对皮内丘疹法致豚鼠的疼痛在0.25～60 h均有极显著的镇痛作用(P<0.01),其中,KPF注射用原位凝胶中剂量组优于低剂量组,在0.25～56h无痛反应率均超过90%。从结果来看,KPF注射用原位凝胶低、中剂量,均有较明显的长效镇痛作用,且中剂量镇痛效果更好。1.2小鼠扭体试验 选用清洁级小鼠50只,雌、雄各半,随机分为5组。除空白对照组外,其他组分别皮下注射生理盐水、800 mg/kg的安乃近注射液、100 mg/kg和200 mg/kg的KPF注射用原位凝胶。以扭体反应数为评价指标,观察镇痛效果。结果显示,KPF注射用原位凝胶低、中剂量对醋酸所致小鼠扭体在0.5～60 h均有极显著的镇痛作用(P<0.01),其中,KPF注射用原位凝胶中剂量组优于低剂量组,在0.5～60 h镇痛率均超过80%。从结果来看,KPF注射用原位凝胶低、中剂量,均有较明显的长效镇痛作用,且中剂量镇痛效果更好。1.3兔子肠切除、端端吻合术镇痛试验 选用清洁级兔子30只,雌、雄各半,随机分为5组。除模型组外,其他组分别于手术后单次注射盐酸吗啡(2.5 mg/kg)、手术前注射KPF注射用原位凝胶(20 mg/kg)、手术后注射KPF注射用原位凝胶(20 mg/kg)、手术前注射KPF注射用原位凝胶(20 mg/kg)联合手术后单次注射盐酸吗啡(2.5 mg/kg)。按照墨尔本大学疼痛评分量表(UMPS)的评分标准,观察镇痛效果。结果显示,与模型组相比,KPF注射用原位凝胶术前、术后给药组,及与盐酸吗啡合用组对术后疼痛在0～48h均有极显著性的镇痛作用(P<0.01),在60h有显著性的镇痛作用(P<0.05)。从结果来看,KPF注射用原位凝胶术前、术后给药一次,均有较明显的长效镇痛作用。2.10%KPF注射用原位凝胶犬体内药动学研究2.1血浆样品KPF的HPLC检测方法建立 色谱条件:流动相乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液(43:57,磷酸调pH值3.3),流速0.85 mL/min,检测波长255 nm,柱温35℃,进样量20μL。酮洛芬在0.05～25 μg/mL范围内浓度与峰面积的线性关系良好,回归方程为Ar=80.221C-0.2851(R~2=1),方法专属性强;检测限为0.02 μg/mL,定量限为0.05 pg/mL;精密度及回收率均符合方法学要求。血浆样品经乙腈沉淀蛋白,取上层提取液水浴氮气吹干,再用流动相复溶后,进样测定,该提取方法回收率高,分离度高,无杂质干扰峰。2.2 10%KPF注射用原位凝胶犬体内药动学参数测定 选用健康犬6只,体重10 kg左右,雌、雄各半,以10 mg/kg b.w.单次皮下注射KPF注射用原位凝胶,HPLC法测定血浆中KPF浓度,所得血药浓度-时间数据用WinNonlin药动学分析软件分析处理。得出KPF注射用原位凝胶的主要药动学参数如下:Tmax为3.17±0.98h;Cmax 为 11.62±1.64 μg/mL;T1/2λz 为 16.19±13.27h;MRT 为 13.75±2.42h;AUCO→t 为167.55±10.83h·μg/mL;AUC0→∞为 167.68±10.77h·μg/mL。试验结果表明:KPF 注射用原位凝胶在犬体内有效血药浓度时间较长,消除缓慢,药物在体内作用时间延长。