目的：多胺(腐胺、精脒、精胺)参与细胞增殖、分化和凋亡等重要生命过程，细胞内多胺代谢紊乱也与包括肿瘤在内的多种疾病的发生发展密切相关。鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(AZIN1)是重要的多胺代谢调节蛋白，它通过多种途径调控细胞的生长。本研究的前期工作发现一个迄今尚未见报道的重要现象，即将高表达AZIN1的B16-F1小鼠黑素瘤活细胞接种到小鼠体内后，出现先成瘤后逐渐消退的现象，同时在这种肿瘤自愈的小鼠体内产生了很强的针对同种肿瘤细胞的免疫杀伤效应，提示高表达AZIN1可能使B16-F1肿瘤细胞发生了免疫原性转化。为了验证上述假说，本实验将在细胞和实验动物的水平上，分析AZIN1对肿瘤细胞免疫原性的影响及其分子机制。　　方法：　　(1) AZIN1的原核表达纯化及抗体制备：pET-28a/AZIN1原核表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后，IPTG诱导蛋白表达，利用Ni-NTA树脂于变性条件下亲和层析纯化人AZIN1蛋白，然后将纯化的AZIN1蛋白用作抗原免疫小鼠后制备小鼠抗人AZIN1多克隆抗体；　　(2) AZIN1高表达的肿瘤细胞活化BMDC分析：将pcDNA3.1(+)AZIN1真核表达质粒稳定转染B16-F1小鼠黑素瘤细胞，Western Blot和qPCR鉴定稳定高表达AZIN1的细胞株(B16/O)，从小鼠股骨和胫骨中提取骨髓细胞，经体外诱导分化获得骨髓来源的树突状细胞(BMDC)，将B16/O细胞培养上清与BMDC共培养，然后采用流式细胞术检测其对BMDC活化的能力；　　(3) AZIN1蛋白复合体活化抗肿瘤免疫效应分析：用包被有AZIN1抗体的免疫磁珠从B16-F1小鼠黑色素瘤细胞中分离得到AZIN1蛋白复合物，将分离得到的AZIN1蛋白复合物免疫小鼠，两次免疫之后在小鼠皮下接种B16-F1小鼠黑色素瘤活细胞，然后观察各组小鼠的成瘤及肿瘤生长情况。取免疫后的小鼠脾脏，分离得到脾脏淋巴细胞，乳酸脱氢酶释放实验（LDH）检测脾脏淋巴细胞对B16-F1小鼠黑色素瘤细胞杀伤效应，本实验以原核表达纯化的AZIN1蛋白和生理盐水为对照；　　(4) AZIN1结合肿瘤抗原分析：用免疫磁珠分离AZIN1蛋白复合物后，采用蛋白质谱法分析与AZIN1结合的蛋白分子，并从中筛选和验证其中可能存在的肿瘤相关抗原；　　(5) AZIN1对肿瘤细胞免疫原性转化相关基因表达的影响：从稳定高表达AZIN1的B16-F1细胞和对照细胞中提取RNA，通过转录组测序，分析高表达AZIN1对B16-F1细胞基因表达谱的影响，然后探索AZIN1高表达是否通过对相关基因的表达调控而参与肿瘤细胞的免疫原性转化。　　结果：　　(1)成功原核表达与纯化了人AZIN1蛋白并以此为抗原制备出抗AZIN1小鼠多克隆抗体，该抗体特异性高，可用于AZIN1的Western Blot、细胞免疫组织化学和ELISA分析；　　(2)成功获得高表达AZIN1的B16-F1细胞株B16/O，该细胞中AZIN1蛋白表达水平比对照细胞高5.9倍，mRNA表达水平比对照组细胞高18倍；　　（3）用B16/O细胞条件性培养基继续培养BMDC，能更有效地使后者活化；　　（4）从B16-F1肿瘤细胞中分离的AZIN1蛋白复合物免疫小鼠后，在小鼠体内激发了抗同种肿瘤的免疫效应，与对照组小鼠比较，免疫AZIN1蛋白复合物组的小鼠成瘤率更低，肿瘤体积和肿瘤质量更小，小鼠血清中INF-γ、IL-12的含量显著性升高；AZIN1蛋白复合物免疫小鼠后，与其它组小鼠相比，AZIN1蛋白复合物组小鼠脾脏淋巴细胞能在体外高效杀伤B16-F1细胞；　　（5）对与AZIN1结合的蛋白质已经完成质谱分析的基础性数据采集工作，从中发现多个候选蛋白（潜在的肿瘤抗原或抗原提呈蛋白），对这些蛋白的验证实验及其在AZIN1介导的肿瘤细胞免疫原性转化中的作用将进一步的研究；　　（6）转录组测序分析发现AZIN1高表达对肿瘤细胞内基因表达谱产生了影响，目前已确定多个候选基因用于下一步验证。　　结论：本研究的阶段性研究结果初步提示，AZIN1可能具有结合和提呈肿瘤抗原的能力，从肿瘤细胞中分离的AZIN1蛋白复合体在体外具有活化抗原提呈细胞，在体内具有激发抗肿瘤免疫效应的功能。AZIN1的促抗原提呈功能可能是其介导肿瘤细胞免疫原性转化的分子基础之一。