【摘 要】
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目的:观察电针刺激印堂穴和双侧迎香穴对AD模型大鼠空间学习能力、海马区突触结构、海马区p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平的影响,旨在进一步探讨电针干预AD模型大鼠的生物学机制,为临床AD患者的治疗提供依据及思路。方法:1.选取成年雄性SD大鼠65只,经旷场实验后,剔除1只不合格大鼠,随机选取12只作为空白组,12只作为假手术组。剩余的40只大鼠采用Aβ1-42海马区注射进行模型制备,剔除造模死亡
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目的:观察电针刺激印堂穴和双侧迎香穴对AD模型大鼠空间学习能力、海马区突触结构、海马区p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平的影响,旨在进一步探讨电针干预AD模型大鼠的生物学机制,为临床AD患者的治疗提供依据及思路。方法:1.选取成年雄性SD大鼠65只,经旷场实验后,剔除1只不合格大鼠,随机选取12只作为空白组,12只作为假手术组。剩余的40只大鼠采用Aβ1-42海马区注射进行模型制备,剔除造模死亡的大鼠2只,及造模后不合格的大鼠2只,将剩余的36只大鼠分为3组:模型组、电针组、药物组,每组12只。假手术组采用等剂量的生理盐水海马区注射制备。电针组采用电针刺激印堂和双侧迎香穴进行干预;药物组采用盐酸多奈哌齐,以3mg/kg/d的剂量,对大鼠进行灌胃干预;模型组、假手术组及空白组每日给予相同时间、相同程度的抓取刺激,不做任何干预。疗程:各组大鼠,每日干预1次,5d为1个疗程,间歇2d,共观察4个疗程。2.实验及指标检测方法:采用旷场实验剔除焦虑不合格大鼠;采用Morris水迷宫实验筛选AD模型制备成功的大鼠及定位航行实验评价实验大鼠空间学习能力变化;采用透射电镜观察海马区突触的结构变化;采用免疫组化法及蛋白免疫印迹法检测大鼠海马区p-PI3K、p-Akt蛋白表达情况。结果:1.大鼠日常行为学观察显示:空白组与假手术组大鼠毛发有光泽,进食饮水量实验期间无明显变化,活动自如,反应能力良好;模型组大鼠毛发干枯无光泽,进食及饮水量显著下降,动作迟缓、笨拙,反应能力显著降低;电针组和药物组大鼠干预后毛发光泽度、进食及饮水量逐渐趋向良好,动作及反应程度逐渐提高。2.水迷宫定位航行实验结果显示:对于大鼠空间学习能力的评判结果,与空白组相比,模型组逃避潜伏时间显著延长（P<0.01）;与模型组相比,电针组和药物组逃避潜伏时间均明显缩短（P<0.05）;由此提示:电针及盐酸多奈哌齐干预均能够改善AD模型大鼠的空间学习能力。3.透射电镜下观察海马区突触结构显示:空白组与假手术组的突触界面及双层膜结构清晰,突触前、后膜间界限及突触间隙清晰,囊泡分布密集。模型组突触膜结构不完整,突触界面融合消失,突触前、后膜间界限及突触间隙大多模糊不清,突触前膜内的囊泡明显减少且分布不均;电针组和药物组中海马组织突触膜部分溶解,结构部分完整,突触界面较清晰,突触前、后膜间界限及突触间隙均有不同程度的改善并趋向清晰,位于突触前膜内的囊泡逐渐增加且趋向密集状分布。由此提示:电针及盐酸多奈哌齐干预能够促进AD模型大鼠海马区突触结构修复。4.采用免疫组化法检测大鼠海马p-PI3K、p-Akt阳性细胞表达:与空白组相比,模型组p-PI3K、p-Akt阳性细胞表达均显著减少（P<0.01）;与模型组相比,电针组和药物组p-PI3K、p-Akt阳性细胞表达均增多（P<0.05）;由此提示:电针及盐酸多奈哌齐干预能够提升AD模型大鼠p-PI3K、p-Akt蛋白表达。5.采用免疫印迹法检测大鼠海马p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平:与空白组相比,模型组p-PI3K、p-Akt蛋白表达均显著降低（P<0.01）;与模型组相比,电针组p-PI3K、p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.05）,药物组p-PI3K、p-Akt蛋白表达无显著差异（P>0.05）;由此提示:电针能够提升AD模型大鼠p-PI3K、p-Akt蛋白表达。结论:1.通过电针及西药盐酸多奈哌齐干预,海马区Aβ1-42注射制备的AD模型大鼠的行为学表现、空间学习能力、海马区突触结构、海马区p-PI3K、p-Akt蛋白表达均得到不同程度改善。2.电针干预AD模型大鼠效应的产生与PI3k/Akt信号通路相关,具体效应可能是通过“提高PI3K/Akt蛋白表达—进而促进海马区损伤的突触结构修复—从而改善AD模型大鼠空间学习能力”的链条发挥。
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