在单分子检测技术出现之前,检测方法主要是基于检测分子的总体平均效应,即检测大量由一种(或多种)对象组成的一个整体所表现出的平均响应和平均值。这一平均效应掩盖了许多特殊的个体信息。单分子检测可以对体系中的单个分子进行研究,通过分析其某项物理量随时间的变化关系,可以得到某一分子特性的分布状况或发生特定变化的过程。单分子检测为分子生物学、化学、医学以及纳米材料等许多科研领域的发展提供了一种有效手段。单分子水平上研究分子在表面的行为有助于分析表面的性质和表面上分子的性质、分子的结构与构象、吸附-解吸、横向扩散动力学等。本文主要使用普通型荧光显微镜研究了固?液两相界面的单分子吸附行为,包括建立了单分子水平上定量吸附分析的数据统计方法;比较了不同条件对蛋白分子吸附/解吸行为的影响;用量子点作为染料标记分子,观察脂质体与λ-DNA相互作用。具体工作如下:1.由于噪音的存在使得信号在一定范围内波动,引起数据统计过程中的误差,这种误差对于定量分析而言是有较大干扰的。荧光信号强度和背景强度都会随着入射光强度的变化而变化,但是它们的变化趋势的不同将会引起信号?噪音比、信号?背景比的变化,在入射光强度一定的条件下,选择最合适的曝光时间以获取最大的信号?噪音比及信号?背景比;保证数据采集过程中参数设置的最优化,最大限度的减小误差干扰;实验是在单分子水平上进行的,所以需要通过浓度与点数关系、单步漂白和荧光的特异性来进行单分子的确定;为了保证数据的稳定性和重现性,采用多次测量取均值和统计分布频率的数据处理方式减小误差。2.用Alexa Fluor. 594染料对牛血清白蛋白(BSA)、溶菌酶(Lysozyme)进行了标记,通过观察、统计荧光点数,分别分析了“软蛋白”BSA在pH=3.91、4.89、6.78时以及“硬蛋白”溶菌酶在pH=4.03、6.82、11.05时,在亲水性的玻璃和疏水性的聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane,PDMS)两种不同性质的表面上的吸附量的变化。其变化与蛋白质的结构、蛋白电荷分布及表面电性有密切关系,因而表现一定的规律性。3.初步研究了分别包裹量子点QD 525、585、655的脂质体对YOYO-1-λ-DNA和EthD-2-λ-DNA在玻璃表面上吸附行为的影响。当pH﹥5.5时,λ-DNA是处于自由扩散的运动状态,加入包裹量子点的脂质体能使其吸附固定于玻璃表面。而且脂质体与DNA相互作用存在一定的比例关系,并研究了作用时间、加入表面活性剂和有机物乙醇对它们相互作用的影响。