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第一部分细胞外信号调节激酶(ERK)和P38 MAPK表达水平与人精子活动力的相关性研究目的:比较细胞外信号调节激酶(ERK)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)的磷酸化和蛋白表达水平在正常精子和弱精症患者精子中的差异,旨在探讨ERK和P38MAPK表达水平与精子活动力及密度的相关性。方法:研究对象来自解放军105医院不孕不育门诊,患者常规禁欲3～7天,手淫法取精液于无菌杯中,液化后行常规检查,收集正常精液(精子密度≥20×106 / ml,a≥25%或a + b≥50%)和弱精症患者精液(精子密度≥20×106 / ml,a+b≤40%)各20份,洗涤后提取精子总蛋白,采用免疫印迹(Western Blotting)方法分别检测ERK、P38 MAPK的磷酸化和蛋白表达水平。结果: ERK和P38MAPK在正常精子和弱精症患者精子中均有表达, ERK蛋白表达水平和P38MAPK磷酸化水平在弱精症患者组显著升高(P<0.05),而两组间ERK磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05);两组精子密度均与ERK、P38MAPK蛋白表达水平无明显相关性(r1=0.086,r2=0.121,P均>0.05)。结论:人精子ERK活性降低和P38 MAPK活性增高可能是精子活动力低下的原因之一;但ERK和P38 MAPK蛋白表达水平可能与精子发生无关。第二部分丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂对人精子活动力的影响及其作用机理目的:探讨细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059和P38 MAPK抑制剂SB203580对精子活动力的影响及其作用机制。方法:研究对象来自解放军105医院不孕不育门诊,患者常规禁欲3～7天,手淫法取精液于无菌杯中,液化后行常规检查,分别收集正常精液(精子密度≥20×106 / ml,a≥25%或a + b≥50%)和弱精症患者精液(精子密度≥20×106 / ml,a+b≤40%)各15份,洗涤后,调整精子密度,分别在正常精子和弱精子症精子中加入不同浓度的PD98059和SB203580,检测不同作用时间精子活动力的变化,并采用免疫印迹(Western Blotting)法检测抑制剂干预前后ERK和P38MAPK磷酸化水平的变化。结果:80μmol/LPD98059可显著抑制正常精子活动力,以作用40min最为显著;而60μmol/LSB203580则可显著增加弱精子症患者精子活动力,以作用10min时最为显著;两种抑制剂均可降低ERK和P38MAPK的磷酸化水平。结论:PD98059和SB203580可分别通过阻断ERK和P38MAPK信号转导通路而影响精子活动力,ERK和P38MAPK是调节精子活动力的重要信号转导通路。第三部分蛋白激酶C(PKC)对人精子活动力的影响及其作用机理目的:探讨人精子蛋白激酶C(PKC)的表达水平对精子活动力的影响及其作用机理。方法:研究对象来自解放军105医院不孕不育门诊,患者常规禁欲3～7天,手淫法取精液于无菌杯中,液化后行精液常规检查,分别收集30份正常精液(精子密度≥20×106 / ml,a≥25%或a + b≥50%)和20份弱精子症患者精液(精子密度≥20×106 / ml,a+b≤40%)作为正常对照组和弱精症组。标本洗涤处理后采用流式细胞术(FCM)检测两组精子PKCβⅠ含量;并将正常组精液经密度梯度离心后,分别加入PKC激活剂PMA和抑制剂GF109203X,采用免疫印迹(Western Blotting)方法分别检测PMA和GF109203X作用后ERK磷酸化和蛋白表达水平的变化。结果:弱精组精子PKCβⅠ含量显著低于正常组;加入PKC激活剂PMA后精子ERK磷酸化水平明显升高,加入抑制剂GF109203X后ERK磷酸化水平明显降低。结论:精子活力低下的原因与PKC的含量降低有关, PKC可通过MAPK信号转导途径参与调节精子活动力。