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本课题以成功建立糖尿病肾病(DN)小鼠为动物模型,从血、尿生化学、肾脏病理组织学、分子生物学等方面对肾安提取液进行研究,旨在探讨肾安提取液防治DN的作用及可能机制。实验一,目的：建立DN小鼠动物模型。方法：以C57BL／6小鼠为研究对象,予以腹腔注射链脲佐菌素(STZ,150mg·kg-1),观察小鼠一般情况、血糖、尿蛋白、肾质量／体质量(KW/BW)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)及肾组织光镜、透射电镜下的病理变化。结果：与正常对照组比较,模型组小鼠体重明显下降(P<0.01),第3天即开始血糖持续性升高(P<0.01),1周后出现蛋白尿,4周后BUN、Scr升高(P<0.01).KW/BW明显升高(P<0.01),光镜下显示,肾小球肥大,系膜区增宽,基质增多,肾小球硬化指数增加(P<0.05,P<0.01)；电镜下显示,足突增宽、扁平、融合,足细胞减少,肾小球基底膜(GBM)裸露,GBM明显增厚(P<0.05,P<0.01)。结论：提示腹腔注射STZ(150mg·kg-1)能成功诱导C57BL／6小鼠DN模型。实验二,目的：探讨肾安提取液对DN小鼠生化指标的影响。方法：将C57BL／6小鼠随机分为正常对照组、模型组、厄贝沙坦组、肾安低、中、高剂量组(各9只),各药物干预组分别给予厄贝沙坦10mg/kg.肾安提取液(由黄芪甲苷、淫羊藿苷和1,8二羟基蒽醌组成)2.272mg/kg. 4.544mg/kg.9.088mg/kg灌胃,定期检测血糖、尿蛋白、BUN、Scr。结果：与正常对照组比较,其余各组小鼠血糖均明显升高(P<0.01),随着时间延长,各药物干预组血糖无降低,与模型组无差异(P>0.05)；与模型组比较,各药物干预组尿蛋白定量明显减少(P<0.01),肾安高剂量组与厄贝沙坦组无显著性差异(P>0.05)；第4周未,与模型组比较,各药物干预组BUN明显降低(P<0.05,P<0.01),肾安高剂量组及厄贝沙坦组Scr显著降低(P<0.05,P<0.01),肾安高剂量组BUN显著低于厄贝沙坦组(P<0.05),Scr两组间无显著性差异(P>0.05)。结论：肾安提取液能减少DN小鼠尿蛋白排出,降低BUN、Scr,对DN肾功能具有良好的保护作用,但无降血糖作用。实验三,目的：探讨肾安提取液对DN小鼠肾脏组织形态学影响。方法：分组及给药方法同实验二；采用KW/BW、肾小球硬化指数、纤粘连蛋白(FN)半定量积分、GBM厚度等为观察指标。结果：肾安各剂量组KW/BW明显改善(P<0.05,P<0.01),肾安中、高剂量组与厄贝沙坦组无显著差异(P>0.05)；光镜下肾安各剂组肾组织病理变化较模型组明显减轻,肾小球硬化指数明显改善(P<0.05,P<0.01),肾安中、高剂量组肾小球硬化指数与厄贝沙坦组比较无显著差异(P>0.05)；肾安各剂量组FN表达呈不同程度减弱(P<0.05,P<0.01),肾安高剂量组与厄贝沙坦组无显著性差异(P>0.05)；电镜下肾安各剂量组超微结构明显改善,各组GBM增厚明显减轻(P<0.05,P<0.01),肾安中、高剂量组GBM厚度与厄贝沙坦组无显著差异(P>0.05)。结论：肾安提取液能抑制DN小鼠肾组织FN蛋白表达,改善肾小球肥大,减少ECM积聚,抑制GBM增厚,减轻足细胞损伤,延缓肾小球硬化。实验四,目的：探讨肾安提取液对DN小鼠肾脏转录活化蛋白-1(AP-1)及TGF-β1mRNA及蛋白表达的影响。方法：肾组织标本取材于生化学研究部分,分组方法相同；采用免疫印迹法检测AP-1蛋白含量、实时荧光定量PCR检测TGF-β1mRNA表达及免疫组化检测TGF-β1蛋白含量。结果：肾安提取液各组AP-1(c-Jun亚基)蛋白显著低于模型组(P<0.01),肾安高剂量组与厄贝沙坦组AP-1(c-Jun亚基)蛋白表达无显著性差异(P>0.05)；肾安各剂量组TGF-β1mRNA表达及蛋白含量显著低于模型组(P<0.01),肾安高剂量组与厄贝沙坦组TGF-β1mRNA表达及蛋白含量无显著性差异(P>0.05)。结论：肾安提取液能明显抑制DN小鼠肾组织AP-1蛋白和TGF-β1表达。实验五：目的：探讨肾安提取液对DN小鼠肾皮质p38丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)mRNA及磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)和Smad7蛋白表达的影响。方法：肾组织标本取材于生化学研究部分,分组方法相同；采用实时荧光定量PCR检测p38MAPK mRNA表达,免疫组化法半定量检测p-p38MAPK和Smad7蛋白含量。结果：肾安提取液各组肾皮质p38MAPK mRNA表达显著低于模型组(P<0.01,P<0.05),肾安高剂量组与厄贝沙坦组无显著性差异(P>0.05)；肾安提取液各组肾皮质p-p38MAPK蛋白相对含量显著低于模型组(P<0.01,P<0.05)；肾安高剂量组与厄贝沙坦组无显著性差异(P>0.05)；肾安提取液各组肾皮质Smad7蛋白相对含量显著低于模型组(P<0.01)；肾安高剂量组与厄贝沙坦组无显著性差异(P>0.05)。结论：肾安提取液能抑制DN小鼠肾组织p38MAPK mRNA、p-p38MAPK及Smad7蛋白表达。综上所述,肾安提取液能减少DN小鼠尿蛋白排出,改善DN肾功能,减轻DN小鼠肾组织病理变化,延缓肾小球硬化,对DN肾损害具有良好的保护作用。其作用机制可能与降低肾组织AP-1蛋白表达,抑制TGF-β1表达与信号转导,从而减少ECM积聚,抑制足细胞的凋亡等有关。