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本论文以对硝基酚-β-葡萄糖醛酸苷为底物测定了大肠杆菌在不同培养条件下的β-葡萄糖醛酸酶(β-Glucuronidase,简称β-G)活性,确定了β-G的最优培养条件,并对β-G进行了提取纯化和检测。 通过β-G活性的测定,发现对于提高β-G活性而言,不冻融优于冻融,液体培养优于斜面培养,培养基配方2优于配方1优于配方3,6小时振荡培养优于8天振荡培养。β-G的最优培养条件为:在配方2中振荡培养6小时。配方2的组成为:蛋白胨3%,甘油磷酸钠5%,pH6.8。 通过硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析和磷酸钙吸附层析相结合的方法对β-G进行纯化。β-G最终提纯倍数15.3,回收率5.1%。 采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定β-G纯度及分子量,分离胶浓度12%。粗提β-G电泳凝胶经考马斯亮蓝染色后在72KD和19KD出现两条蛋白带,碱性品红染色表明分子量为72KD的亚基带具有糖链结构。纯化β-G在72KD出现单一条带,为β-G经变性电泳裂解的亚基。