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与检测肿瘤标志物的传统方法相比,表面等离子体共振技术(Surface Plasmon Resonance,SPR)技术能够实现实时、在线检测,实验过程无需标记,操作简单,灵敏度高,而免疫磁珠(Immonumagnetic beads,IMBs)由于具有操作简单、分离速度快、分离效率高、分离过程高保真等诸多优点而被广泛应用于各个领域,在本文中,使用SPR生物传感器对肿瘤标志物癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)进行检测,并引入生物素-链霉亲和素纳米金放大传感信号,提高了检测的灵敏度,并以磁性微球为载体,结合免疫荧光,使用夹心法对CEA进行了定性和半定量检测。第一章:本章分别介绍了肿瘤标志物的检测意义、概念、分类及其检测方法,对SPR技术的原理、优点、检测方法及其应用做了简要的阐述,对免疫磁珠的组成、原理、优点及其应用等进行了概述,在此基础上阐述了本文研究的主要内容。第二章:基于SPR技术,分别采用直接法和双抗体夹心法对癌胚抗原进行检测。对偶联条件溶液pH、流速及抗体浓度进行了考察和优化,最后选择在pH为4.5、流速为10μL/min、浓度为100μg/m L的条件下,对单克隆抗体mAbCEA-C3进行偶联,偶联量为8.475 ng?mm-2。使用直接法测CEA,检测限为12.78 ng/mL。为了提高灵敏度,降低检测限,使用双抗体夹心模式对CEA进行了检测,得到检测限为3.3 ng/m L。与直接法相比,夹心法使灵敏度提高了4.2倍。对人血清加标样品进行检测,样品回收率为102.56%~106.86%,相对标准偏差为4.96%~8.99%,实现了对CEA的快速灵敏检测。第三章:为了进一步提高灵敏度,在使用SPR生物传感器时引入胶体金对信号进行二次放大。首先对链霉亲和素(Streptavidin,SA)标记胶体金的最小蛋白量进行了选择,并对吸附在纳米金颗粒上的SA的量及其活性位点进行了定量检测。结果表明在1 mL胶体金上偶联了8.5μg SA,偶联率为42.5%,每个纳米金颗粒上平均连接了11.92个SA分子,可结合位点数为33.10个,每100 nm2纳米金上的SA有4.69个可结合位点。使用纳米金增强的夹心法检测CEA,SPR响应信号和CEA浓度在1 ng/mL~60 ng/mL具有良好的线性关系,线性方程为:Y=59.8100+6.8540X(ng/m L),R2=0.9772,与夹心法相比,灵敏度提高了3.3倍。结果表明:该方法准确可靠,可用于人血清中CEA的检测。第四章:利用磁性微球结合免疫荧光对CEA进行了定性和半定量检测。首先使用EDC/NHS法活化磁珠上羧基使之与CEA单克隆抗体进行偶联,制成免疫磁珠,用于CEA的捕获。对样品的洗涤次数和免疫反应时间进行了优化,最后选择免疫时间为45 min,洗涤三次。在优化条件下对混合样品中的CEA进行捕获,再使用荧光显微镜进行检测。结果表明,随着CEA浓度的增加,磁性微球表面的荧光强度增强,从而实现了对CEA快速准确的定性和半定量检测。